Κατάλοιπα κλενβουτερόλης σε σφάγια προβάτων, καθώς και ορισμένων άλλων αναβολικών ουσιών σε βιολογικά υγρά και σφάγια νεαρών παχυνόμενων βοοειδών

Abstract

The present experimentation had two objectives, one was to detect and quantify the residues of Clenbuterol in sheep carcass after administration per os in young sheep. The scope was to define the withdrawal period of Clenbuterol before the slaughtering of the animals so that no detectable residues of the drug are left in the animal tissues. The other objective was an overview of the testing of a number of other anabolic substances used as growth promoters in urine and carcass of young beef. The Clenbuterol experimentation involved the use of 12 young sheep, (6 male and 6 female of the Chios breed) aged between 6 and 8 months. Their body weight was recorded and they were separated into two groups. The first group contained 5 male sheep and 5 female sheep. To each animal Clenbuterol was administered per os in a dose of 3.2 μg/kg body weight for 10 consecutive days. The dose given was double the therapeutic dose that is reported for bovine. The second group contained just one male and one female animal used as controls. To those two animals physiological serum was administered instead of clenbuterol. The male animals were housed separately from females under the same housing and living conditions in the premises of the Veterinary Research Institute of NAGREF in the town of Ionia at the outskirts of Thessaloniki. All the sheep used in the experimentation were fed the same feed used in all the animals of the Veterinary Research Institute. The animal feeds used contained alfalfa hay (1.5 kg/animal/day) and a mixture of concentrated feeds (1 kg/animal/day) The results of our experimental work regarding the clenbuterol residues found in sheep carcass after administration of the drug according to the details given were: a) In kidneys we measured by Elisa 3.5 μg/kg clenbuterol the 4th day after administration both in male and female sheep.The residues measured the 24th day of administration ( 14th day of the withdrawal of the drug ) fell to 0.5 μg/kg for the male and to 1μg/kg for the female. The equivalent numbers measured the 52nd day were ND for the male (below the detection limit of the method) and 0.2 μg/kg for the female animals. b) In meat we measured by Elisa 2 μg/kg of clenbuterol the 8th day after administration in male animals and 1 μg/kg in female. The levels measured were down to 0.1 μg/kg after the withdrawal of the drug the 10th day. c) In lungs we measured 2 μg/kg of clenbuterol the 4th day both in male and female animals. The levels were measured down to 0.02 μg/kg on the 24th (14th) day. A rebound effect to 0.2 μg/kg was measured on the 52nd (42nd) day. d) In liver samples we measured by ELISA 5 μg/kg in female animals the 4th day after the beginning of the administration of clenbuterol, then the numbers measured fell to 4 μg/kg on the 8th day and finally down to 0.3 μg/kg on the 24th day. In male animals the concentration that was measured was 10 μg/kg the 8th day and then dropped down to 0.05 μg/kg the 24th day. In female animals we measured a rebound effect to 1 μg/kg on the 38th day and then a further drop down to 0.2 μg/kg on the 52nd day. In male animals the concentration numbers measured produced no rebound effect until the end of the experimentation on the 52nd day. e) The concentration of clenbuterol measured on the same liver samples by GC/MS in the VSD Institute of Belfast, Northern Ireland, U.K. were for both male and female animals 40 μg/kg. On the 8th day numbers for female animals were 45 μg/kg and for male animals 38 μg/kg. On the 24th (14th) day the concentration of clenbuterol was down to 5 μg/kg for male animals and 2 μg/kg for female animals.

Ο σκοπός της διεξαγωγής αυτής της εργασίας ήταν διττός : Πρώτον, να γίνει προσδιορισμός των καταλοίπων της κλενβουτερόλης, όταν αυτή χορηγείται από του στόματος σε αναπτυσσόμενα νεαρά πρόβατα σε δόση διπλάσια της θεραπευτικής που αναφέρεται για βοοειδή (Elliot et al., 1995), ώστε να καθοριστεί ο χρόνος της ενδεχόμενης σφαγής των ζώων από την χορήγησή της κλενβουτερόλης, που να μην συνοδεύται με κατάλοιπά της στους ζωικούς ιστούς. Και Δεύτερον, να διενεργηθεί διερεύνηση της παρουσίας υπολειμμάτων ορισμένων συνήθων αναβολικών ουσιών στα ούρα και στο κρέας σφάγιων νεαρών παχυνόμενων βοοειδών. Για την έρευνα που σχετίζεται με τα κατάλοιπα της κλενβουτερόλης σε πρόβατα χρησιμοποιήθηκαν 12 νεαρά πρόβατα (6 αρσενικά και 6 θηλυκά ζυγούρια φυλής Χίου) ηλικίας 6 ως 8 μηνών περίπου. Τα πρόβατα διαχωρίστηκαν σε δύο ομάδες, αφού πρώτα ζυγίστηκαν ατομικά και σημειώθηκε το σωματικό βάρος (ΣΒ) τους. Η πρώτη ομάδα περιλάμβανε 5 αρσενικά και 5 θηλυκά άτομα, που στο καθένα απ’ αυτά χορηγήθηκε από του στόματος κλενβουτερόλη, επί 10 συνεχείς ημέρες, σε δόση 3,2 μg/kg ΣΒ, η οποία ήταν κοντά στη συνιστώμενη θεραπευτική δόση για βοοειδή. Η δεύτερη ομάδα αποτελούνταν μόνο από 1 αρσενικό και 1 θηλυκό άτομο, τα οποία χρησίμευσαν ως μάρτυρες και λάμβαναν από το στόμα με τον ίδιο τρόπο φυσιολογικό ορό σε ίσο όγκο με το διάλυμα της κλενβουτερόλης. Τα αρσενικά πειραματόζωα διατηρήθηκαν χωριστά από τα θηλυκά (στις εγκαταστάσεις του Κέντρου Κτηνιατρικών Ερευνών του ΕΘ.Ι.ΑΓ.Ε. στην Ιωνία Θεσσαλονίκης), σε δύο διαφορετικά διαμερίσματα, αλλά κάτω από ιδιες συνθήκες μικροκλίματος και γενικά συνθηκών εκτροφής. Τα πρόβατα διατράφηκαν με το συνηθισμένο σιτηρέσιο του πειραματικού ποιμνίου του παραπάνω Ινστιτούτου Κτηνιατρικών Ερευνών. Το σιτηρέσιο αυτό περιλάμβανε σανό μηδικής (1,5 kg /ζώο/ημέρα) και μίγμα συμπυκνωμένων απλών ζωοτροφών (1 kg/ζώο/ημέρα). Από την έρευνά μας σχετικά με τα κατάλοιπα και το χρόνο απομάκρυνσης της κλενβουτερόλης από τον οργανισμό 10 αναπτυσσόμενων νεαρών προβάτων, όταν χορήγηθε σε αυτά σε δόση 3,2 μg/kg σωματικού βάρους/ημέρα και επί 10 συνεχείς ημέρες προέκυψαν τα ακόλουθα αποτελέσματα : α) Στους νεφρούς μετρήθηκαν 3,5 μg/kg κλενβουτερόλη την 4η ημέρα από τη χορήγηση στα αρσενικά και τα θηλυκά πρόβατα. Οι τιμές αυτές μειώθηκαν σε επίπεδα λιγότερο από 0,5 μg/kg για τα αρσενικά την 24η ημέρα από τη χορήγηση (14η ημέρα από τη διακοπή), ενώ στα θηλυκά η τιμή έπεσε στο 1 μg/kg τις ίδιες ημέρες. Οι αντίστοιχες τιμές την 52η ημέρα ήταν μη ανιχνεύσιμες για τα αρσενικά και 0,2 μg/kg για τα θηλυκά. β) Στο κρέας βρέθηκαν την 8η ημέρα 2 μg/kg κλενβουτερόλη στα αρσενικά και 1 μg/kg CBL στα θηλυκά ζώα. Οι τιμές αυτές μειώθηκαν σε επίπεδα λιγότερο από 0,1 μg/kg μετά τη διακοπή της χορήγησης την 10η ημέρα. γ) Οι πνεύμονες εμφάνιζαν τιμές γύρω στα 2 μg/kg κλενβουτερόλη την 4η ημέρα τόσο στα αρσενικά όσο και στα θηλυκά και πτώση σε επίπεδα 0,02 μg/kg την 24η (14η) ημέρα. Μια μικρή ανάκαμψη των τιμών για τα θηλυκά στα 0,2 μg/kg παρατηρήθηκε την 52η (42η) ημέρα. δ) Στο ήπαρ, οι τιμές που πήραμε με ELISA έφτασαν τα 5 μg/kg CBL στα θηλυκά ζώα την 4η ημέρα από την έναρξη της χορήγησης, έπεσαν στα 4 μg/kg CBL την 8η ημέρα και κατέληξαν σε επίπεδα 0,3 μg/kg την 24η ημέρα. Στα αρσενικά ζώα οι τιμές ανεβαίνουν στα 10 μg/kg την 8η ημέρα και μειώνονται σε επίπεδα 0,05 μg/kg την 24η ημέρα. Στα θηλυκά ζώα παρατηρήθηκε ανάκαμψη της τιμής στο 1 μg/kg την 38η ημέρα και μείωση σε επίπεδα λιγότερο από 0,2 μg/kg την 52η ημέρα.