ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΞΑΝΘΑΝΗΣ ΑΠΟ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΣΤΕΛΕΧΗ ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΟΥ XANTHOMONAS CAMPESTRIS: ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΙΣΟΜΕΡΑΣΗΣ ΤΗΣ 6 - ΦΩΣΦΟΡΙΚΗΣ ΜΑΝΝΟΖΗΣ

Abstract

ΣΤΟ ΠΡΩΤΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΤΑ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑ ΠΟΥ ΦΕΡΟΥΝ ΓΟΝΙΔΙΑ ΤΗΣ Β - ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΗΣ Ρ ΜΕΤΑΦΕΡΘΗΚΑΝ ΣΤΟ X. CAMPESTRIS ΜΕ ΣΥΖΕΥΞΗ Η ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ. ΤΑ ΝΕΑ ΣΤΕΛΕΧΗ ΕΛΕΓΧΘΗΚΑΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΞΑΝΘΑΝΗΣ ΣΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΤΥΡΟΓΑΛΑΚΤΟΣ ΚΑΙ ΦΑΝΗΚΕ ΟΤΙ ΣΥΝΘΕΤΟΥΝ ΑΥΞΗΜΕΝΑ ΠΟΣΑ ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΑ ΜΕ ΤΟ ΣΤΕΛΕΧΟΣ - ΜΑΡΤΥΡΑ. ΣΤΟ ΔΕΥΤΕΡΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΙΣΟΜΕΡΑΣΗ ΤΗΣ GP - ΜΑΝΝΟΖΗΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΟΙ ΚΥΡΙΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΟΥ. ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΧΗΜΙΚΗΣ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΣΗΣ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΚΟΝΤΑ Η ΜΕΣΑ ΣΤΟ ΕΝΕΡΓΟ ΚΕΝΤΡΟ ΥΠΑΡΧΕΙ ΠΙΘΑΝΟΤΑΤΑ ΜΙΑ ΙΣΤΙΔΙΝΗ, ΠΟΥ ΕΙΝΑΙ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ. Η ΙΣΟΜΕΡΑΣΗ ΤΗΣ GP - ΜΑΝΝΟΖΗΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟΝ ΨΕΥΔΑΡΓΥΡΟ IN VITRO ΚΑΙ IN VIVO. ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙΠΑΡΟΥΣΙΑ 20 ΜΜ ZUCL2 ΔΕΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΤΑΙ Η ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ XAN B ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΣΕ ΕΠΙΠΕΔΟ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗΣ, ΑΛΛΑ ΚΑΙ Ο ΧΡΟΝΟΣ ΗΜΙΖΩΗΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΤΡΙΠΛΑΣΙΑΖΕΤΑΙ. ΕΠΟΜΕΝΩΣ ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΟΤΙ Ο ΨΕΥΔΑΡΓΥΡΟΣ ΠΑΙΖΕΙ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΟ ΚΑΙ ΔΟΜΙΚΟ ΡΟΛΟ.

IN THE FIRST PART OF THE THESIS PLASMIDS CONTAINING A Β - GALACTOSIDASE GENE AND A PROTEINASE P GENE WERE TRANSFERRED TO X. CAMPESTRIS BY CONJUGATION OR TRANSFORMATION. THE NEWLY CONSTRUCTED STRAINTS WERE TEST FOR XANTHAN GUM PRODUCTION IN WHEY MEDIUM AND IT WAS FOUND THAT THEY PRODUCE HIGHER AMOUNTS OF THE POLYSACCHARIDE THAN THE CONTROL STRAIN. IN THE SECOND PART OF THE THESIS, PHOSPHOMANNOSE ISOMERASE WAS PURIFIED AND THE BASIC PROPERTIES OF THIS ENZYME WERE STUDIED. CHEMICAL MODIFICATION EXPERIMENTS INDICATED THAT YEAR OR AT THE ACTIVE SITE OF THE ENZYME IS A HISTIDYL RESIDUE, WHICH IS NECESSARY FOR CATALYTIC ACTIVITY. PHOSPHOMANNOSE ISOMERASE WAS ACTIVATED BY ZINC IN VITRO AND IN VIVO. IN THE PRESENCE OF 20 ΜM ZUCL2 THE HALF LIFE OF THE ENZYME WAS TRIPLICATED,BUT NO INDUCTION ON XAN B TRANSCRIPTION WAS DETECTED. OUR RESULTS IMPLY THATZINC MAY HAVE A DOUBLE ROLE, CATALYTIC AND STRUCTURAL.