ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΜΙΑΣ Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗΣ ΚΑΙ ΑΞΙΟΠΟΙΗΣΗ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΥΔΡΟΛΥΣΗ ΤΗΣ ΛΑΚΤΟΖΗΣ

Abstract

A STUDY WAS CONCLUTED ON THE FORMS AND THE PROPERTIES OF A PURIFIED (CRYSTALINE) BETA-GLUCOSIDASE FROM BARLEY. THE ENZYME HAS BEEN IMMOBILISED ON COTTON CLOTH AND USED FOR THE HYDROLYSIS OF LACTOSE IN WHEY. A BATCH PROCESS WAS DEVELOPED FOR THE PURIFICATION OF THE ENZYME THAT LASTS LESS THAN 24 HOURS. THE ENZYME PREPARATION IS NOT HOMOGENEOUS AND HAS A SPECIFIC ACTIVITY OF 8U/MG INSTEADOF 16U/MG OF THE ENZYME THAT HAS BEEN PURIFIED BY THE CONVENTIONAL (NON BATCH) METHOD. BETA-GLUCOSIDASE WAS TREATED BY SITE-SPECIFIC REAGENTS. THE EXPERIMENTS SHOWED THE PARTICIPATION OF (AT LEAST) ONE HISTIDINE AND CARBOXYLIC RESIDUE IN THE CATALYTIC ACTIVITY. THE PRODUCTS OF THE TRANSGLYCOSYLATION ACTIVITY OF BETA GLUCOSIDASE WITH SUBSTRATES CELLOBIOSE AND LACTOSE, WERE STUDIED IN RESPECT OF THEIR DEGREE OF POLYMERISATION AND TYPE OF GLYCOSIDIC BOND. USING GERMINATED BARLEY SEEDS AS ENZYME SOURCE, A FORM OF BETA-GLUCOSIDASE THAT EXHIBITSLOWER RELATIVE MOLECULAR MASS, WAS PURIFIED. THE TWO FORMS (THE ONE FROM DORMANT AND GERMINATED SEEDS), DO NOT DIFFER IN THE PHYSICAL PARMETERS, HAVE THE SAME N-TERMINAL AMINO ACID SEQUENCE, BUT DIFFER IN THEIR C-TERMINI. BETA-CLUCOSIDASE PURIFIED BY THE BATCH PROCESS WAS IMMOBILIZED COVALENTLY ON POLYETHYLENIMINE ACTIVATED COTTON CLOTH WITH GLUTARALDEHYDE SPACERS, AND WAS USED FOR THEHYDROLYSIS OF LACTOSE IN DERPOTEINISED WHEY IN A MODEL ROTATING BATCH REACTOR. THE HYDROLYSIS REACHED 40% OVER A PERIOD OF 20 HOURS. OPTIMAL OPERATING CONDITIONS WERE TEMPERATURE OF 37C, ROTATING VELOSITY OF 400 RPM AND USE OF FOUR BAFFLES.(ABSTRACT TRUNCATED).

ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΗΤΑΝ Η ΜΕΛΕΤΗ ΜΙΑΣ Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗΣ ΑΠΟ ΚΡΙΘΑΡΙ, ΟΣΟΝ ΑΦΟΡΑ ΤΟ ΕΝΕΡΓΟ ΚΕΝΤΡΟ, ΤΗΝ ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΑ ΤΗΣ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΒΛΑΣΤΗΣΗ ΣΠΟΡΩΝ ΚΡΙΘΑΡΙΟΥ, ΤΗΝ ΤΡΑΝΣΓΛΥΚΟΣΥΛΙΩΤΙΚΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗ ΚΑΙ ΤΗ ΔΥΝΑΤΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΝΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΕΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΔΡΟΛΥΣΗ ΛΑΚΤΟΖΗΣ ΑΠΟ ΤΥΡΟΓΑΛΑ ΣΕ ΒΙΟΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΑ ΚΑΘΗΛΩΜΕΝΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ. Η Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΜΕ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ ΔΙΑΛΕΙΠΟΝΤΟΣ ΕΡΓΟΥ ΚΑΙ ΤΟ ΤΕΛΙΚΟ ΕΝΖΥΜΙΚΟ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΜΑ ΗΤΑΝ ΜΙΣΗΣ ΠΕΡΙΠΟΥ ΚΑΘΑΡΟΤΗΤΑΣ ΑΠΟ ΕΚΕΙΝΟ ΠΟΥ ΠΡΟΚΥΠΤΕΙ ΟΤΑΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΝΤΑΙ ΑΝΑΛΥΤΙΚΕΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ. ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΕΝΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ, ΑΝΑΓΝΩΡΙΣΤΗΚΑΝ ΩΣ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ ΤΗΣ Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗΣ, ΤΟΥΛΑΧΙΣΤΟΝ ΜΙΑ ΙΣΤΙΔΙΝΗ ΚΑΙ ΕΝΑ ΚΑΡΒΟΞΥΛΙΚΟ ΑΜΙΝΟΞΥ. ΑΝΙΧΝΕΥΘΗΚΑΝ ΠΡΟΙΟΝΤΑ ΤΡΑΝΣΓΛΥΚΟΣΥΛΙΩΣΗΣ ΜΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΑ ΚΕΛΛΟΒΙΟΖΗ ΚΑΙ ΛΑΚΤΟΖΗ, ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΟΝ ΒΑΘΜΟ ΠΟΛΥΜΕΡΙΣΜΟΥ ΤΟΥΣ ΚΑΙ ΤΟ ΕΙΔΟΣ ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΖΙΤΙΚΩΝ ΤΟΥΣ ΔΕΣΜΩΝ. ΑΠΟ ΣΠΟΡΟΥΣ ΚΡΙΘΑΡΙΟΥ ΠΟΥ ΕΙΧΑΝ ΒΛΑΣΤΗΣΕΙ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΜΙΑ ΜΟΡΦΗ ΜΙΚΡΟΤΕΡΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ. ΟΙ ΔΥΟ ΜΟΡΦΕΣ ΕΧΟΥΝ ΤΙΣ ΙΔΙΕΣ ΦΥΣΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΚΑΙ ΑΜΙΝΟΤΕΛΙΚΑ ΑΚΡΑ, ΑΛΛΑ ΔΙΑΦΕΡΟΥΝ ΣΤΙΣ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΕΣ ΣΤΑΘΕΡΕΣ ΚΑΙ ΚΑΡΒΟΞΥΛΙΚΑ ΑΚΡΑ. Η Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΜΕ ΤΗ ΜΟΡΦΗ ΚΑΘΗΛΩΜΕΝΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΣΕ ΒΙΟΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΑ ΓΙΑ ΤΗΝΥΔΡΟΛΥΣΗ ΛΑΚΤΟΖΗΣ ΣΕ ΤΥΡΟΓΑΛΑ. ΩΣ ΦΟΡΕΑΣ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΒΑΜΒΑΚΕΡΟ ΥΦΑΣΜΑ. ΤΟΜΕΓΙΣΤΟ ΠΟΣΟΣΤΟ ΥΔΡΟΛΥΣΗΣ ΗΤΑΝ 40% ΣΕ ΧΡΟΝΙΚΟ ΔΙΑΣΤΗΜΑ 120 ΩΡΩΝ 37 C ΚΑΙ ΑΝΑΔΕΥΣΗ 400 ΣΤΡ /ΛΕΠΤΟ. ΤΕΛΟΣ Η Β-ΓΛΥΚΟΣΙΔΑΣΗ ΚΡΥΣΤΑΛΛΩΘΗΚΕ ΜΕ ΣΚΟΠΟ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΟΥ ΤΗΣ.