Συγκριτική μελέτη του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, της απόπτωσης και της αγγειογένεσης σε οδοντογενείς κύστεις των γνάθων

Abstract

Abdnormalities involving cell proliferation, apoptosis and angiogenesis are important factors in tumorogenesis. The purpose of this study was to investigate these biological processes in odontogenic keratocysts compaired to other types of odontogenic cysts (dentigerous and residual cysts). The material of the study consisted of 42 cases of Odontogenic KeratoCysts (Keratocyst Odontogenic Tumours, OKC), 26 cases of Dentigerous Cysts (DC) and 15 cases of Residual Cysts (RC). The specimens were retrieved from the files of the Department of Oral Pathology and Medicine, Dental School of the National and Kapodostrian University of Athens. All materials were previously fixed in 10% neutral buffered formalin solution, dehydrated by graded alcohol, embedded in paraffin and prepared for immunohistochemistry at the Department of Histology, Medical School of the National and Kapodostrian University of Athens. The expression of the polyclonal antibody Caspase-3 (R&D systems, AF835) and the monoclonal antibodies Ki67 (DakoCytomation, M7240), VEGF (C-1)(Santa Cruz Biotechnology, sc-7269) respectively was detected with a standard three-step strept ABC complex method (kit DAKO StrepABComplex/HRP,Code No.K0377). Proteolytic digestion for Ki67 and VEGF of the sections was performed with citric sodium solution (2,1% citric sodium,pH =6) and proteolytic digestion for Caspase-3 was performed with EDTA (0,5 mol/L) solution (pH= 8,0) Optimal dilution of the antibodies were 1:100 for Ki67 and VEGF and 0,3μg/mL for Caspase-3. Proliferation and apoptosis were evaluated according to the proportion of Ki67 antigen and caspase-3 positive lining epithelial cells . Angiogenesis was evaluated by assessing epithelial cells immunoreactivity for vascular endothelial growth factor (VEGF) The results of this study are summarized as follows: 1. Positive epithelial cells immunoreactivy for Ki67, VEGF and caspase-3 was detected in all three types of odontogenic cysts 2. Ki67 expression was higher in OKCs compared to DC (p<0,0001) and RC (p<0,0000). 3. Transition of Ki67 expression in a cyst to a higher one level the possibility for this lesion to be an OKC 15,03 times (OR=15,03). 4. The expression of Caspase-3 in RC was higher compared to OKCs and DCs (p<0,001). 5. There was a positive correlation between the expression of Ki67 and Caspase-3 (p<0,02) in OKCs. 6. There was a statistically increased intensity of VEGF expression in OKCs compared to OKCs and DCs (p<0,007). 7. A statistically significant difference in VEGF intensity expression between OKCs and the other 2 types of cysts (p=0,023) was observed. 8. Transition of VEGF expression in a cyst to a higher level increases the possibility for this lesion to be an OKC 1,59 times (OR=1,59). 9. In RCs strong expression of caspase-3 was observed whereas expression of Ki67 was weak. in the majority of cases (92,31%) . 10. Increased cell proliferation and angiogenesis are observed but apoptosis seems to be an independent parameter in the lining epithelium of OKCs. 11.VEGF is expressed in OCKs,DC and RC and it’s not correlated with imflamation,playing an important role in the pathogenesis of these cysts. These data suggest that proliferation is associated with angiogenesis in OKCs. Furthemore, proliferation and angiogenesis but not apoptosis may be important in the progression of OKCs and may explain their aggressive behavior.

Με σκοπό την κατάδειξη της νεοπλασματικής ή μη φύσης της οδοντογενούς κερατινοκύστης σε σχέση με τις οδοντοφόρες και υπολειμματικές κύστεις διερευνήθηκε με ανοσοϊστοχημικές μεθόδους η έκφραση του Ki67, κασπάση-3 και VEGF στα τρία είδη αυτών των κύστεων. ΥΛΙΚΟ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΣ.Το υλικό της μελέτης αποτέλεσαν 83 ιστοτεμάχια από κυστικές βλάβες, από τα οποία , 42 ιστοτεμάχια παρουσίαζαν ιστολογική εικόνα οδοντογενούς κερατινοκύστης(ΟΚ), 26 οδοντοφόρου κύστης(ΟδΚ) και τα υπόλοιπα 15 ιστοτεμάχια ιστολογική εικόνα υπολειμματικής κύστης(ΥΚ). Τα ιστοτεμάχια της μελέτης είχαν εξετασθεί στο ιστοπαθολογικό στο Εργαστήριο της Στοματολογίας του Οδοντιατρικού Τμήματος του Πανεπιστημίου Αθηνών κατά την χρονική περίοδο 1978-2004. Όλες οι παραπάνω βιοψίες (τομές 5 μm αιματοξυλίνης-ηωσίνης) εξετάσθηκαν εκ νέου μικροσκοπικά και επιλέχθηκαν εκείνες που εμφάνιζαν ιστολογική εικόνα αντιπροσωπευτική της κάθε ομάδας βλαβών, σύμφωνα με τα καθιερωμένα ιστολογικά κριτήρια. Πρόσθετα κριτήρια επιλογής ήταν η ύπαρξη επαρκούς ιστού και η παραμονή του σε μονιμοποιητικό διάλυμα φορμόλης 10% για χρόνο 24-48 ώρες. Η ανοσοϊστοχημική ανίχνευση των μονοκλωνικών αντισωμάτων anti-Ki67 (DakoCytomation, M7240), anti-VEGF (C-1) αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology, sc-7269) και του πολυκλωνικού αντισώματος έναντι της caspase -3 (R&D systems, AF835) βασίσθηκε στην τεχνική του συμπλέγματος στρεπταβιδίνης-βιοτίνης σε τρία στάδια (three-step strept ABC complex method), η οποία ανήκει στις έμμεσες ανοσοενζυμικές μεθόδους. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ.Από την παρούσα μελέτη, προέκυψαν τα ακόλουθα ευρήματα: 1. Ανοσοαντίδραση για το αντίσωμα Ki67 παρατηρήθηκε στο οδοντογενές επιθήλιο και στα τρία είδη κύστεων της μελέτης. 2. Η έκφραση του μορίου Ki67 στις ΟΚ ήταν υψηλότερη από την αντίστοιχη στις ΟδΚ (p<0,0001) και τις ΥΚ (p<0,0000). .