Κυτταρογενετικός έλεγχος σε ασθενείς με χρόνια νεφρική ανεπάρκεια

Abstract

The purpose of this study was to identify the levels of Sister ChromatidExchanges (SCEs), if there is any cytostaticity or cytotoxicity, and moreoverthe possible instability of the genetic material in patients with Chronic RenalFailure after culturing of their peripheral blood lymphocytes of their blood.This study was done in 32 patients with CRF (with an average age of56.2 years old) from whom 18 had also a cancer, and furthermore in 18healthy blood donors (with an average age of 44.6 years old) from whom noone was a smoker or under the influence of drugs or virus infections.The samples were peripheral lymphocytes blood cultures with heparin,using 11 drops of blood in 5 ml chromosomal medium. After that, there wasan incubation at 37οC for 72 hours. Cell proliferation was allowed for at least 2mitotic cycles with the presence of BrdU in a final concentration of 5μg/ml andmitomycin C (MMC) in a final concentration of 15ng/ml added at the beginningof the cell cultures. After 70 hours, colcemide was added in a finalconcentration of 0,5 μg/ml for two hours, and at the end of the incubationperiod the cells were collected and Giemsa dye was applied (using themodified method FPG).There was an evaluation of the Proliferation Rate Index (PRI) of thelymphocytes as an index of cytostaticity, and an evaluation of Mitotic Indices(MI) as an index of cytotoxicity.There was a significant increase of the frequency of SCEs, estimatedat 9,23 SCEs/cell, in comparison to the frequency of the healthy donors wherethe average amount was 4.61 SCEs/cell. The increase percentage of SCEslevel was calculated at 100.2% (p<0,05).Furthermore, a decrease was observed at the PRIs and at the MIs arks(ΜΔ) of the patients, in comparison to those of the healthy donors. Thereduction of PRIs touched the percentage of 2,8%, which is particularly lowand it indicates the existence of a cytostaticity, in comparison to the reductionpercentage that was observed at the case of MIs, that was found 64,4% and itindicates a high cytotoxicity.It is important also to emphasize that there wasn’t any significantdifference at the above results between the patients with CRF and thepatients with CRF and cancer.Finally, by adding MMC there was a significant statistical increase ofthe SCEs (p<0,05) at the patients with CRF in comparison to healthy donors.That indicates the increased chromosomal fragility in the genetic material ofthese patients, a fact that leads to precaution and medication usage withcaution in patients with CRF.

Σκοπός της παρούσης μελέτης ήταν η ανίχνευση των επιπέδων τωνχρωματιδιακών ανταλλαγών (Sister Chromatid Exchanges, SCEs), δηλαδή οέλεγχος γονοτοξικότητας, κυτταροστατικότητας ή και κυτταροτοξικότητας καιεπιπλέον η πιθανή ευθραυστότητα του γενετικού υλικού ασθενών με ΧΝΝΤΣμε ή χωρίς καρκίνο, μετά από καλλιέργεια περιφερικών λεμφοκυττάρων τουαίματός τους και τη συσχέτιση όλων αυτών των δεικτών μεταξύ τους, σεσύγκριση με ομάδες φυσιολογικών ατόμων.Η τεχνική διαδικασία περιλαμβάνει καλλιέργεια λεμφοκυττάρωνπεριφερικού αίματος ασθενών ή υγιών ατόμων σε ειδικά καλλιεργητικά υλικάκαι επεξεργασία τους με τη μέθοδο των χρωματιδιακών ανταλλαγών (SisterChromatid Exchanges). Οι χρωματιδιακές ανταλλαγές είναι ένα φυσικόφαινόμενο άμεσα συνδεμένο με την αντιγραφική φάση του γενετικού υλικούτων κυττάρων. Μία χρωματιδιακή ανταλλαγή είναι η ανταλλαγή γενετικού υλικού μεταξύ δύο αδελφών χρωματίδων, πριν αυτές ξεχωρίσουν στο στάδιοτης μετάφασης. Η οπτική παρατήρησή τους στο μικροσκόπιο απαιτεί τηνπαρουσία BrdU (5-bromodeoxy-uridine), τουλάχιστον για τον πρώτο από δύοσυνεχείς κύκλους διπλασιασμού του DNA, δηλαδή το φαινόμενο γίνεταιαντιληπτό μετά από δύο συνεχείς κυτταρικές διαιρέσεις. Οποιαδήποτεχρωματιδιακή ανταλλαγή δεν γίνεται ορατή στην πρώτη συνθετική φάση,παρά μόνο μετά το τέλος και της δεύτερης συνθετικής φάσης. Έτσι το σύνολοτων χρωματιδιακών ανταλλαγών στη μετάφαση της δεύτερης γενιάς τωνκυττάρων παριστάνει το σύνολο των ανταλλαγών, δηλαδή των βλαβών στοDNA που έγιναν στους δύο προηγούμενους κυτταρικούς κύκλους.Από την ανίχνευση της διεθνούς βιβλιογραφίας φαίνεται ότι δεν είναιπολλές οι δημοσιευμένες μελέτες που αφορούν στο γενετικό υπόβαθρο τηςΧΝΝ ή του καρκίνου του νεφρού. Σκοπός λοιπόν της παρούσας μελέτης ήταν ηπροσπάθεια ανίχνευσης μιας πραγματικής ή λανθάνουσας χρωματοσωματικήςευθραυστότητας σε ασθενείς με ΧΝΝΤΣ με ή χωρίς νεοπλασία.Η όλη εργασία αποτελείται από το Γενικό και το Ειδικό Μέρος. ΤοΓενικό Μέρος χωρίζεται σε πέντε κεφάλαια, όπου αναπτύσσονται τα επίμέρους θέματα που αφορούν την παρούσα διατριβή, τους νεφρούς, τονκαρκίνο των νεφρών, την ΧΝΝΤΣ και τη μεθοδολογία των χρωματιδιακώνανταλλαγών που χρησιμοποιήθηκε, τη Μιτομυκίνη C (MMC), γνωστόαντιβιοτικό-αντινεοπλασματικό που χρησιμοποιήθηκε ως θετικός παράγονταμεταλλαξιγένεσης.Στο Ειδικό Μέρος περιγράφονται το υλικό και η μεθοδολογία τωνπειραμάτων μας. Κατόπιν ακολουθεί η έκθεση των αποτελεσμάτων σεπίνακες και ιστογράμματα για τους επιμέρους βιολογικούς δείκτες, ηστατιστική τους ανάλυση και ο σχολιασμός των αποτελεσμάτων. Τέλος ημελέτη κλείνει με τη συζήτηση των αποτελεσμάτων, την εξαγωγήσυμπερασμάτων, την περίληψη στα ελληνικά και στα αγγλικά και τη σχετικήβιβλιογραφία, διαδικτυακή, ελληνική και διεθνή.