Μελέτη λοίμωξης από ιούς ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) σε ασθενείς με προκαρκινωματώδεις αλλοιώσεις και καρκίνο του τραχήλου της μήτρας

Abstract

HPV viruses belong to family Papovaviridae, genus Pappilomavirus. More than 120 genotypes of the virus have been identified. The HPV viral particle consists of an approximately 8.000-bp circular double-stranded DNA, surrounded by an icosahedral capsid. Based on the association with cervical cancer, HPV types are divided into low risk and high risk HPV types. HPV is classified according to the difference in DNA sequences of E6, E7 and Ll. When the nucleotide sequences differ by more than 10%, an HPV is assigned a new genotype. The virus infects the basal cells of the dermal layer, during sexual contact. The time from infection to release of virus will take about 3 weeks. The period between infection and the appearance of lesions is highly variable and can vary from weeks to months. HPV infection is mostly sexually transmitted. Most HPV infections don’t cause any symptoms and eventually go away, as the body's own defense system clears the virus. 15 to 23 years old adolescent women have high rates of temporarily HPV infection ( about 80%). About 10% of women infected with HPV develop persistent HPV infection. Women with persistent high-risk HPV infections are at greatest risk for developing cervical cancer. Most reliable methods for detection and genotyping of HPV viruses according to international literature are PCR-based methods and solid phase hybridization. HPV is detected by PCR at 97,7% of cervical cancers. Our objective was the detection and genotyping of HPV viruses from women with low and high grade cervical intraepithelial lesions and examine risk factors for HPV infection. Also detection and genotyping of HPV viruses in a cohort of healthy women (normal PAP test) was accomplished. The study has been conducted in Department of Microbiology, Medical School, University of Athens. A total of 148 cervical swabs were collected from Greek women with abnormal cytology undergo a colposcopy in Department of 1st Obstetrics and Gynaecology Clinics of University of Athens. Also 34 cervical swabs from healthy Greek women (normal PAP test) were collected. DNA extraction from cervical swabs was performed using kit of Wizard Genomic DNA Purification Kit, Promega Corporation. HPV DNA detection was carried out by PCR and nested PCR using kit that includes primers for amplification of L1 region of the virus. Genotyping of HPV was performed by reverse hybridization using specific probes linked to nylon strips with the amplified viral region L1 (ΑΒ Αnalitica, Via Svizzera 16 - 35127 PADOVA, ITALY, ................................................................................................

Οι ιοί HPV ανήκουν στην οικογένεια Papovaviridae και το γένος Pappilomavirus. Μέχρι σήμερα έχουν χαρακτηριστεί περισσότεροι από 120 γονότυποι των ιών HPV. To γονιδίωμα των ιών των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) αποτελείται από κυκλικό διπλής έλικας DNA μεγέθους 8000bp, που περιβάλλεται από καψίδιο και εικοσαεδρικό πρωτεϊνικό περίβλημα. Oι διάφοροι HPV γονότυποι ανάλογα με την ογκογενετική τους ικανότητα διακρίνονται σε χαμηλού (low risk HPV) και υψηλού κινδύνου (high risk HPV). Οι HPV γονότυποι προκύπτουν από την νουκλεοτιδική αλληλουχία των γονιδίων E6, E7 και L1. Ένας τύπος του ιού HPV θεωρείται καινούργιος εάν αυτή η αλληλουχία διαφέρει περισσότερο από 10% από κάθε άλλο τύπο του ιού. O ιός εισέρχεται μέσω μικροτραυματισμών του επιθηλίου του γεννητικού βλεννογόνου κατά τη σεξουαλική επαφή και εγκαθίσταται στα αναπτυσσόμενα βασικά κύτταρα του επιθηλίου. Ο χρόνος από τη λοίμωξη μέχρι την έκλυση του ιού είναι περίπου τρεις εβδομάδες. Η περίοδος μεταξύ λοίμωξης και εμφάνισης των βλαβών ποικίλλει ευρέως από εβδομάδες έως μήνες. Ο κύριος τρόπος μετάδοσης του ιού είναι η σεξουαλική επαφή. Κατά την περίοδο έναρξης των σεξουαλικών επαφών οι περισσότερες από τις HPV λοιμώξεις έχουν παροδικό χαρακτήρα. Στην ομάδα νέων γυναικών 15-23 ετών παρατηρούνται υψηλά ποσοστά λοίμωξης από HPV (αθροιστι­κά μέχρι 80% περίπου των νεαρών γυναικών), η οποία όμως έχει παροδικό χαρακτήρα. Η χρονίως παραμένουσα λοίμωξη σε ένα μικρό ποσοστό γυναικών (10%) από στελέχη HPV υψηλού κινδύνου είναι αυτή που αυξάνει σημαντικά τον κίνδυνο για ανάπτυξη σοβαρών προκαρκινικών αλλοιώσεων και διηθητικού ακανθοκυτταρικού καρκινώματος τραχήλου μήτρας. Η ταυτοποίηση των HPV ιών γίνεται με μοριακή ανίχνευση του γενετικού τους υλικού. Οι σπουδαιότερες τεχνικές ανίχνευσης και τυποποίησης στην κλινική πράξη είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR), οι παραλλαγές της PCR και ο υβριδισμός. Η μέθοδος με μεγάλη ευαισθησία, που θεωρείται σήμερα μέθοδος αναφοράς είναι η PCR, η οποία εφαρμόζεται σε δείγματα τραχηλικού επιχρίσματος (τα πλακώδη κύτταρα της επιφάνειας του τραχήλου περιέχουν μεγάλο αριθμό ιών). O HPV είναι ανιχνεύσιμος με PCR στο 97,7% του καρκίνου του τραχήλου μήτρας. Ο in situ υβριδισμός εφαρμόζεται σε βιοψίες και κωνοειδείς εκτομές καθώς και σε επιχρίσματα κυττάρων τραχήλου. ........................................