Μεταφορείς πουρινών και πυριμιδινών των παθογόνων πρωτόζωων leishmania και trypanosoma

Abstract

In the present thesis we have established the presence of a single, high-affinity uracil transporter in L. major promastigotes, designated LmU1. Based on the data from inhibition plots, the binding energies for the interactions of various compounds with the transporter were determined and a model was proposed for the interaction between uracil and LmU1 permeant site. In the second and third part of the thesis we used the heterologous expression system of S. cerevisiae in order to build a model on how TbNBT1 the hypoxanthine transporter of T. brucei recognizes its substrates. The parallel mutational and in silico analyses comes to further establish the tertiary model of the transporter and identify amino acid residues involved in transporter function.

Τα παθογόνα πρωτόζωα Leishmania και Trypanosoma τα οποία προκαλούν μερικές από τις σημαντικότερες ασθένειες του ανθρώπου και άλλων θηλαστικών είναι αυξότροφα για τις πουρίνες. Στο πρώτο μέρος της διατριβής πραγματοποιήθηκε πλήρης βιοχημικός χαρακτηρισμός του μεταφορέα ουρακίλης LmU1 των προμαστιγωτών μορφών της Leishamia major, ο οποίος φανέρωσε την ύπαρξη ενός μεταφορέα υψηλής συγγένειας και μεταφορικής ικανότητας για την ουρακίλη. Στο δεύτερο και τρίτο μέρος της εργασίας πραγματοποιήθηκε κινητική ανάλυση του μεταφορέα υποξανθίνης του T. Brucei. Επίσης η τυχαία και κατευθυνόμενη μεταλλαξογένεση του μεταφορέα ενίσχυσε τη σημασία του πέμπτου και όγδοου δαιμεμβρανικού τμήματος στην εξειδίκευση και τη λειτουργικότητά του. Τέλος οι μεταλλαγές αμινοξέων του έβδομου διαμεμβρανικού τμήματος αποκαλύπτουν τη συμμετοχή του στο καθορισμό της αρχιτεκτονικής του κέντρου δέσμευσης, ενώ προτείνεται ένα τριτοταγές μοντέλο του μεταφορέα στηριζόμενο στην υψηλή ομολογία που διαθέτει σε επίπεδο δευτεροταγούς δομής με το μεταφορέα λακτόζης της E. coli.