Δομικές μελέτες της πρωτείνης HrcQb από το τύπου ΙΙΙ εκκριτικό σύστημα της pseudomonas syringae

Περίληψη

Αντικείμενο της παρούσας διατριβής είναι η δομική μελέτη της πρωτεΐνης HrcQB από το φυτοπαθογόνο βακτήριο Pseudomonas syringae pv. phaseolicola. Έμφαση δόθηκε στο καρβοξυτελικό άκρο της πρωτεΐνης (79 κατάλοιπα) στο οποίο εντοπίζεται υψηλή αμινοξική συντήρηση με ομόλογες από άλλα φύτο- και ζωοπαθογόνα. Η πρωτεΐνη αποτελεί συντηρημένο μέλος της τύπου ΙΙΙ εκκριτικής μηχανής των Gram-αρνητικών βακτηρίων ενώ ομόλογες πρωτεΐνες συμμετέχουν επίσης στο μηχανισμό βιογένεσης του μαστιγίου. Για τον προσδιορισμό της δομής χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος της κρυσταλλογραφίας ακτίνων Χ. Αρχικά, η πλήρους μήκους HrcQB απομονώθηκε από κύτταρα Escherichia coli που την υπερέκφραζαν. Γρήγορα διαπιστώθηκε ότι είναι ένα μόριο ιδιαίτερα ευαίσθητο σε πρωτεόλυση. Προσπάθειες για τη βελτιστοποίηση της πορείας απομόνωσης κατέληξαν σε ένα σχήμα καθαρισμού που απέδιδε σχετικά σταθερό και καθαρό προϊόν. Παρόλα αυτά, όλες οι προσπάθειες κρυστάλλωσης της πρωτεΐνης απέβησαν άκαρπες. Στη συνέχεια, η προσοχή μας εστιάστηκε σ ...
περισσότερα

Περίληψη σε άλλη γλώσσα

The subject of this work is the structural study of the HrcQB protein from the plant pathogenic bacterium Pseudomonas syringae pv. phaseolicola. Interestingly, high sequence conservations between the HrcQB and homologues from plant and animal pathogens are concentrated at the carboxy-terminal part (79 residues) where our crystallographic study focused. HrcQB is a conserved component of the type III secretion apparatus in Gram-negative bacteria with homologous proteins participating in the export mechanism for the flagellum assembly. The method of X-ray crystallography was used for structure determination. Initially, the full length HrcQB protein, overexressed in Escherichia coli cells, was purified by chromatography. The molecule was very sensitive to proteolysis even in the presence of protein inhibitors at low temperatures. After the optimization of the purification scheme, stable and pure protein was produced. However, all the crystallization attempts were unsuccessful. Subsequently ...
περισσότερα
Πρέπει να είστε εγγεγραμένος χρήστης για έχετε πρόσβαση σε όλες τις υπηρεσίες του ΕΑΔΔ  Είσοδος /Εγγραφή

Όλα τα τεκμήρια στο ΕΑΔΔ προστατεύονται από πνευματικά δικαιώματα.

DOI
10.12681/eadd/16002
Διεύθυνση Handle
http://hdl.handle.net/10442/hedi/16002
Εναλλακτικός τίτλος
Structural studies of the HrcQb protein from the type III secretion system of pseudomonas syringae
Συγγραφέας
Φαδούλογλου, Βασιλική Ευάγγελος
Ημερομηνία
2004
Ίδρυμα
Πανεπιστήμιο Κρήτης. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Βιολογίας
Εξεταστική επιτροπή
Κοκκινίδης Μιχαήλ
Μπουριώτης Βασίλης
Πανόπουλος Νικόλαος
Γαλανόπουλος Βασίλης
Ηλιόπουλος Ηλίας
Οικονόμου Αναστάσιος
Παπαματθαιάκης Ιωσήφ
Λέξεις-κλειδιά
Προσδιορισμός τρισδιάστατης διαμόρφωσης πρωτείνης; Κρυσταλλογραφία ακτίνων Χ; Διάγραμμα περίθλασης ακτίνων Χ; Απομόνωση πρωτεϊνών; Κρυστάλλωση πρωτείνης; Εκκριτικό σύστημα τύπου ΙΙΙ; Παθογένεια
Χώρα
Ελλάδα
Γλώσσα
Ελληνικά
Άλλα στοιχεία
233 σ., εικ.