Παραγωγή έμβυων βοοειδών in vitro

Abstract

ΣΚΟΠΟΣ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ ΗΤΑΝ Η ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ Η ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΣΗ ΕΝΟΣ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ ΕΜΒΡΥΩΝ ΒΟΟΕΙΔΩΝ ΜΕ ΕΞΩΣΩΜΑΤΙΚΗ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗ. Η IN VITRO ΩΡΙΜΑΝΣΗ,ΤΩΝ ΩΑΡΙΩΝ ΓΙΝΟΤΑΝ ΣΕ ΟΜΑΔΕΣ ΤΩΝ 15 ΕΩΣ 20 ΣΕ 400 ML ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ PARKER ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΕΝΟΥ ΜΕ ΟΡΟ ΑΓΕΛ ΑΔΑΣ ΣΕ ΟΙΣΤΡΟ ΚΑΙ FSH-P. ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΟΤΗΤΑ ΕΝΟΣ ΣΤΑΤΙΚΟΥ ΚΑΙ ΕΝΟΣ ΚΙΝΗΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΤΩΝ ΩΑΡΙΩΝ ΧΩΡΙΣ ΤΗΝ ΠΡΟΣΘΗΚΗ ΒΟΗΘΗΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ. ΤΑ ΔΥΟ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΑΠΕΔΩΣΑΝ ΙΚΑΝΟΠΟΙΗΤΙΚΑ ΠΟΣΟΣΤΑ ΩΡΙΜΑΝΣΗΣ (87,58% ΚΑΙ 82,38%, ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ) ΚΑ Ι ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ (67,39% ΚΑΙ 62,64%) ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ Ρ>0.05. Η IN VITRO ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗ, ΤΩΝ ΩΑΡΙΩΝ ΓΙΝΟΤΑΝ ΣΕ ΟΜΑΔΕΣ ΤΩΝ 15 ΕΩΣ 20 ΣΕ 40ΜL ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ TYRODE ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΕΝΟΥ ΜΕ BSA, ΑΛΑΤΑ ΠΥΡΟΣΤΑΦΥΛΙΚΟΥ, ΚΑΙ ΗΠΑΡΙΝΗ. ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΟΤΗΤΑ ΔΥΟ ΑΝΑΛΟΓΙΩΝ, 20.000 ΚΑΙ 10.000 ΣΠΕΡΜΑΤΟΖΩΑΡΙΩΝ/ΩΑΡΙΟ, ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΗΣ ΣΥΝΕΠΩΑΣΗΣ ΤΩΝ ΓΑΜΕΤΩΝ. Η ΜΙΚΡΟΤΕΡΗ ΑΝΑΛΟΓΙΑ ΑΠΕΔΩΣΕ ΣΗΜΑΝΤΙΚΑ ΨΗΛΟΤΕΡΟ ΠΟΣΟΣΤΟ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ ΣΕ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΑΥΤΟ ΤΗΣ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗΣ ΑΝΑΛΟΓΙΑΣ (75,92% ΚΑΙ 67,39%, ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ Ρ<0.05).Η IN VITRO ΑΝΑ ΠΤΥΞΗ ΤΩΝ ΕΜΒΡΥΩΝ ΓΙΝΟΤΑΝ, ΣΕ ΟΜΑΔΕΣ ΤΩΝ 15 ΕΩΣ 20 ΣΕ 400ΜL ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ ΜΡΜ ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΕΝΟΥ ΜΕ ΟΡΟ ΑΓΕΛΑΔΑΣ ΣΕ ΟΙΣΤΡΟ, ΣΕ ΣΥΓΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΜΕ ΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΤΟΥ ΩΟΦΟΡΟΥ ΔΙΣΚΟΥ Η ΣΕ ΕΠΙΘΗΛΙΟ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΜΕΝΟ ΑΠΟ ΚΥΤΤΑΡΑ ΤΟΥ ΚΟΚΚΩΔΟΥΣ ΥΜΕΝΑ. Η ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΩΝ ΔΥΟ ΣΥΣΤΗΜΑΤΩΝ ΣΥΓΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ ΚΑΤΩ ΑΠΟ ΔΥΟ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ ΑΤΜΟΣΦΑΙΡΑΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ, ΣΤΑΘΕΡΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ ΧΑΜΗΛΗΣ ΠΕΡΙΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΕ Ο2 (5% CO2, 5% O2, 90% N2) Η ΜΕΤΑΒΑΛΛΟΜΕΝΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ, ΧΑΜΗΛΗΣ ΠΕΡΙΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΕ Ο2 ΤΟ ΠΡΩΤΟ 48ΩΡΟ (5% CO2, 5% O2, 90% N2) ΚΑΙ ΣΤΗ ΣΥΝΕΧΕΙΑ, ΥΨΗΛΗΣ ΠΕΡΙΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΕ Ο2 (ΑΠΟΚΟΠ

THE AIM OF THIS STUDY WAS TO STANDARDIZE AND OPTIMIZE A PRODUCTION SYSTEM OF BOVINE EMBRYOS, AFTER IN VITRO FERTILIZATION. FOR IN VITRO MATURATION, GROUPS OF 15-20 OOCYTES WERE TRANSFERRED IN 400 ΜL OF MATURATION MEDIUM (MPM), ENRICHED WITH OESTROUS COW SE RUM, (OCS) AND FSH-P. IN THE EXPERIMENTS OF IN VITRO MATURATION OF THE OOCYTES, THE EFFECTIVENESS OF BOTH STATIC AND FLUX CULTURE SYSTEMS WAS STUDIED, WITHOUT THE ADDITION OF AUXILIARY CELLS (GRANULOSA CELLS). IT WAS FOUND THAT THE TWOCULTURE SYSTEMS DID N OT DIFFER SIGNIFICANTLY AS REGARDS EFFECTIVENESS, WHILE BOTH GAVE SATISFACTORY MATURATION PERCENTAGES (87,58%AND 82,38%, RESPECTIVELY, P>0.05). THE OOCYTES, AFTER IN VITRO MATURATION, WERE CLASSIFIED INTO GROUPS OF 15-20, IN 400ΜL OF MODIFIED FERTILIZATIO N TYRODE'S MEDIUM, SUPPLEMENTED WITH BSA, SALTS OF PYRUVIC ACID, AND HEPARIN. IN THESE TRIALS THE EFFECTIVENESS OF CO-INCUBATION OF TWO DIFFERENT RATIOS OF SPERMATOZOA OVER OOCYTES (20.000/1 AND 10.000/1) WAS ALSO STUDIED, ON THE BASIS OF FERTILIZATION PER CENTAGES. FROM THE RESULTS OBTAINED IT FOLLOWED THAT THE RATION OF 10.000/1 (SPERMATOZOA/OOCYTE) GAVE SIGNIFICANTLY HIGHER FERTILIZATION PERCENTAGES IN COMPARISON WITH THAT OF 20.000/1 SPERMATOZOA /OOCYTE (75,92% AND67,39%, RESPECTIVELY, P<0.05). AFTER THE END OF CO-INCUBATION OF GAMETES THE OOCYTES-ZYGOTES WERE CLASSIFIED INTO GROUPS OF 15-20 IN 400ΜL MEDIUM (MPM), ENRICHED WITH OCS. IN VITRO DEVELOPMENT OF EMBRYOS WAS STUDIED UNDER TWO CULTURE SYSTEMS, I.E. WITH CUMULUS CELLS SURROUNDING THE OOCYTES FERTI LIZED IN VITRO AND WITH MONLAYER EPITHELIUM GRANULOSA CELLS, (ABSTRAC