ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΩΝ ΣΤΗΝ ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΟΥ ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΟΥ C-FOS

Abstract

IN OUR STUDIES CONCERNING THE MOLECULAR MECHANISM OF INTERFERENCE BY GLUCOCORTICOID HORMONES OF THE MITOGENIC SIGNAL TRANSMISSION, WE INVESTIGATED THEIR INVOLVEMENT IN THE REGULATION OF THE C-FOS ONCOGENE EXPRESSION. WE HAVE SHOWN THAT, LIGAND ACTIVATED GLUCOCORTICOID RECEPTOR (GR), SPECIFICALLY INHIBITED THE SERUM-INDUCED C-FOS PROMOTER (-1400 TO +42) ACTIVATION IN LTK AND NIH3T3 FIBROBLASTS, AS WELL AS IN HELA CELLS. IN VITRO, GR WAS FOUND TO BIND SPECIFICALLY ONTHE C-FOS 5' FLANKING REGION (-404 TO -222). THE DNASEL FOOTPRINTING PATTERN OF GR REVEALED TWO DISTINCT BINDING SITES (SITE II: -323 TO -310 AND SITE I: -308 TO -297). THE METHYLATION INTERFERENCE ASSAY IDENTIFIED 3 GR CONTACT BASESIN CODING STRAND (-305, -306, -316) AND 4 IN NONCODING STRAND (-303, -313, -314, -322). THE TWO GR BINDING SITES IDENTIFIED, LIE WITHIN THE SERUM RESPONSE ELEMENT (SRE). SRE IS TARGET NOT ONLY FOR GR BUT ALSO FOR VARIOUS POSITIVE REGULATORS OF C-FOS TRANSCRIPTION. THE NEGATIVE RESPONSE TO GLUCOCORTICOIDS WAS MEDIATED ALSO IN VIVO BY THE SRE AND CORRELATED WITH THE RELATIVE ABUNDANCE OF ACTIVE GR. THE SUPPRESSING ABILITY OF GR DEPENDED ON ITS DNA BINDING DOMAIN (DBD), THE TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION DOMAIN Τ1 AND THE HORMONE BINDING DOMAIN AS WELL. MOREOVER, DISRUPTION OF THE GR BINDING SITE I, LED TO ABOLISHMENT OF THE SUPPRESSIVE EFFECT, SUGGESTING THAT, THE BINDING OF GR ONTO ITS INTACT BINDING SITES WITHIN THE SRE IS THE KEY EVENT OF THE REPRESSION MECHANISM. (ABSTRACT TRUNCATED)

ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΥ ΤΗΣ ΠΑΡΕΜΒΟΛΗΣ ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΩΝ ΣΤΗΝ ΔΙΑΔΟΣΗ ΤΟΥ ΜΙΤΟΓΟΝΟΥ ΣΗΜΑΤΟΣ, ΔΙΕΡΕΥΝΗΘΗΚΕ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΥΠΟΔΟΧΕΑ ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΚΟΡΤΙΚΟΕΙΔΩΝ (GR) ΣΤΗ ΡΥΘΜΙΣΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΣΗΜΑΝΤΙΚΟΥ ΓΙΑ ΤΟΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟ ΟΓΚΟΓΟΝΙΔΙΟΥ C-FOS. ΑΠΟΔΕΙΧΘΗΚΕ ΟΤΙ, Ο GR ΠΑΡΕΜΠΟΔΙΖΕΙ ΕΙΔΙΚΑ ΤΗΝ ΕΠΑΓΟΜΕΝΗ ΑΠΟ ΤΟΝ ΟΡΡΟ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ ΠΕΡΙΟΧΩΝ ΤΟΥ C-FOS ΣΕ ΙΝΟΒΛΑΣΤΕΣ ΠΟΝΤΙΚΟΥ NIH3T3. ΣΕ IN VITRO ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΚΑΘΥΣΤΕΡΗΣΗΣ ΔΕΙΧΘΗΚΕ ΟΤΙ Ο GR ΣΥΝΔΕΕΤΑΙ ΕΙΔΙΚΑ ΣΤΟ ΤΜΗΜΑ -404 ΕΩΣ -222 ΤΩΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ ΠΕΡΙΟΧΩΝΤΟΥ C-FOS ΚΑΙ ΜΑΛΙΣΤΑ ΣΕ ΔΥΟ ΘΕΣΕΙΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ (ΘΕΣΗ ΙΙ: -323 ΕΩΣ -310 ΚΑΙ ΘΕΣΗΙ : -308 ΕΩΣ -297), ΠΟΥ ΕΝΤΟΠΙΣΤΗΚΑΝ ΜΕ ΤΗ ΜΕΘΟΔΟ ΑΠΟΤΥΠΩΣΗΣ ΜΕ DNΑΣΗ Ι. ΜΕ ΤΗΝ ΜΕΘΟΔΟ ΠΑΡΕΜΒΟΛΗΣ ΜΕΘΥΛΙΩΣΗΣ ΔΕΙΧΘΗΚΕ ΟΤΙ ΣΥΝΔΕΟΜΕΝΟΣ Ο GR, ΕΦΑΠΤΕΤΑΙ ΜΕ 3ΓΟΥΑΝΙΝΕΣ ΣΤΗΝ ΚΩΔΙΚΕΥΟΥΣΑ ΑΛΥΣΙΔΑ (-305, -306, -316) ΚΑΙ 4 ΣΤΗ ΜΗ ΚΩΔΙΚΕΥΟΥΣΑ (-303, -313, -314, -322). ΟΙ ΔΥΟ ΘΕΣΕΙΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ ΤΟΥ GR ΒΡΙΣΚΟΝΤΑΙ ΜΕΣΑ ΣΤΟΣΤΟΙΧΕΙΟ ΑΠΟΚΡΙΣΗΣ ΣΤΟΝ ΟΡΡΟ (SRE), ΠΟΥ ΑΠΟΤΕΛΕΙ ΣΤΟΧΟ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ GR, ΑΛΛΑ ΚΑΙ ΑΛΛΩΝ ΘΕΤΙΚΑ ΔΡΩΝΤΩΝ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΩΝ ΠΑΡΑΓΟΝΤΩΝ. Η ΚΑΤΑΣΤΟΛΗ ΕΙΝΑΙ ΣΥΝΑΡΤΗΣΗ ΤΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ ΤΟΥ GR ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΚΑΙ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΤΗΝ IN VIVO ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ GR ΣΤΟ SRE ΑΛΛΑ ΚΑΙ ΣΤΗ ΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΗΣ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗΣ Τ1 ΚΑΙ ΤΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ ΤΗΣ ΟΡΜΟΝΗΣ. ΚΑΤΑΣΤΡΟΦΗ ΤΗΣ ΘΕΣΗΣ ΣΥΝΔΕΣΗΣ Ι ΤΟΥ GR ΜΕ ΣΗΜΕΙΑΚΗ ΜΕΤΑΛΛΑΞΗ, ΟΔΗΓΗΣΕ ΣΕ ΑΡΣΗ ΤΟΥ ΦΑΙΝΟΜΕΝΟΥ ΤΗΣ ΚΑΤΑΣΤΟΛΗΣ. Ο GR ΚΑΤΑΣΤΕΛΛΕΙ ΕΙΔΙΚΑ ΤΗΝ ΜΕΣΩ ΤΗΣ PKC ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΗΣ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗΣ ΤΟΥ C-FOS ΚΑΙ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΙ ΤΗΝ ΑΝΕΞΑΡΤΗΤΗ DE NOVO ΠΡΩΤΕΙΝΟΣΥΝΘΕΣΗΣ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗ ΤΟΥ MRNA ΤΟΥ C-FOS. (ΠΕΡΙΚΟΠΗΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)