Διερεύνηση της χρόνιας λεμφογενούς λευχαιμίας με μεθόδους κλασικής και μοριακής κυτταρογενετικής

Abstract

AIM: a) The karyotypic study of CLL patients by finding the appropriate mitogen for CLL cells in order to identify all chromosomal aberrations and the unknown prognosis of some rarer b) The identification of the submicroscopic aberrations of CLL by FISH analysis. c) The investigation of UGT1A1*28 polymorphism in CLL. d) The identification of specific genotoxic agents probably associated with the disease. METHODS: Karyotype was performed on unstimulated and stimulated with TPA and DSP30/IL-2 bone marrow cells, derived from 237 CLL patients. FISH studies were accomplished in 126 patients using LSIp53/LSIATM, LSI D13S319/LSI 13q34/CEP12 Multi-Color Probe Sets. UGT1A1*28 polymorphism was investigated in 109 patients and 108 controls. A lifetime occupational history and other risk factor information were collected from 138 patients and 142 controls.RESULTS: The median age of patients was 64.9 years. The sex ratio (males/females) was 1.63. The new combination of mitogens DSP-30/IL2 presented higher ability to detect the malignant clone compared to TPA (OR=121,51, 95% CI=16,62-888,51, P>0,0001). Karyotype revealed chromosomal aberrations in 62.4%. FISH analysis detected abnormal hybridization patterns in ~70%. Genotypic analysis of UGT1A1 showed no significant difference in the distribution of genotypes [TA6/TA6 (normal homozygous), TA6/TA7 (heterozygous), TA7/TA7 (variant homozygous)] between cases and controls. On the contrary, the incidence of TA7/TA7 was significantly elevated in patients with abnormal FISH patterns (P=0.006) and +12 (P=0.011) while those carrying del(11q) had a higher frequency of TA7 (OR=3.09, 95% CI=1.19-8.08, P=0.030). Patients’ stratification into prognostic groups according to FISH aberrations indicated higher incidence of TA7/TA7 in patients with intermediate (P=0.003) or/and poor prognosis (P=0.016). Furthermore, patients had a CLL or LPD family history (P<0,0001) or/and had been exposed to petroleum (P<0,0001), pesticides/chemical fertilizers (P<0,0001) and ionizing radiation more often than controls. Moreover del(11q) and del(13q) were more frequent in patients exposed to pesticides (P= 0,050) and rubber (P= 0,044) respectively, while patients with CLL or LPD family history carried more often del(11q) (P=0.000), del(13q) (P=0.034), +12 (P=0.014).DISCUSSION: A trend of CLL to appear more often in younger ages was revealed. The new combination of mitogens DSP30/IL-2 was proved to better stimulate CLL cells compared to TPA. Karyotype revealed various chromosomal aberration including some rare. FISH analysis revealed the submicroscopic deletions of the disease. The parallel application of both methods is necessary in CLL investigation. Furthermore, UGT1A1*28 polymorphism might be one of the possible predisposing factors to certain forms of CLL, those presenting +12 and del(11)(q22). The onset of CLL was linked to patients’ family history and systematic exposure to petroleum, pesticides and ionizing radiation. Patients’ CLL or LPD family history was also linked to the occurrence of del(11q), del(13q) and + 12, while exposure to pesticides and rubber was associated with del(11q) and del(13q), respectively.

ΣΤΌΧΟΣ: α) Η καρυοτυπική μελέτη των ασθενών με Χρόνια Λεμφική Λευχαιμία (ΧΛΛ) μέσω της ανεύρεσης του καταλληλότερου διεγέρτη των παθολογικών κυττάρων ώστε να ταυτοποιηθεί το σύνολο των χρωμοσωμικών αλλοιώσεων, η συχνότητα και η πρόγνωσή τους. β) Η ταυτοποίηση των υπομικροσκοπικών αλλοιώσεων της νόσου με μοριακή κυτταρογενετική (FISH). γ) Η διερεύνηση του πιθανού ρόλου του UGT1A1*28 πολυμορφισμού στη ΧΛΛ. δ) Η ταυτοποίηση συγκεκριμένων παραγόντων κινδύνου για την εκδήλωση της νόσου. ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ: Ο καρυότυπος πραγματοποιήθηκε σε αδιέγερτα και διεγερμένα με TPA και το νέο συνδυασμό διεγερτών DSP30/IL-2, κύτταρα μυελού των οστών 237 ασθενών. Σε 126 από αυτά εφαρμόστηκε παράλληλα FISH χρησιμοποιώντας τους συνδυασμούς μοριακών ιχνηθετών: LSIp53/LSIATM LSID13S319/LSI13q34/CEP12 Multi-Color Probe Sets. Η γονοτυπική ανάλυση του UGT1A1*28 πραγματοποιήθηκε σε 109 ασθενείς και 108 μάρτυρες. Επιπλέον συμπληρώθηκαν επιδημιολογικά δελτία από 137 ασθενείς και 141 μάρτυρες. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ: Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν τα 64.9 έτη. Η αναλογία ανδρών/γυναικών ήταν 1.63. Ο συνδυασμός DSP-30/IL2 κρίθηκε ικανότερος για την ανίχνευση παθολογικού κλώνου σε σχέση με το TPA (OR=121,51, 95% CI= 16,62-888,51, P=>0,0001). Ο καρυότυπος ανέδειξε χρωμοσωμικές αλλοιώσεις στο 62,4%. Ανιχνεύτηκαν όλες οι γνωστές αλλοιώσεις της νόσου (συχνότερη +12) αλλά και σπανιότερες. Η FISH ανέδειξε στο 69,05% των ασθενών ανώμαλα πρότυπα υβριδισμού [συχνότερη del(13)(q14.3)]. Η κατανομή γονοτύπων ήταν σχεδόν ομοιόμορφη μεταξύ ασθενών και μαρτύρων [ΤΑ6/ΤΑ6 (ομόζυγος για το φυσιολογικό), ΤΑ6/ΤΑ7 (ετερόζυγος), ΤΑ7/ΤΑ7 (ομόζυγος για το παθολογικό)]. Αντιθέτως, o ΤΑ7/ΤΑ7 εμφανίστηκε σημαντικά αυξημένος στους ασθενείς με ανώμαλα πρότυπα υβριδισμού (P=0.006) και +12 (P=0.011), ενώ εκείνοι με del(11q) είχαν αυξημένη συχνότητα του ΤΑ7 (OR=3.09, 95% CI= 1.19-8.08, P=0.030). Επίσης ο ΤΑ7/ΤΑ7 υπερείχε στους ασθενείς με ενδιάμεσης (P=0.003) και κακής (P=0.016) πρόγνωσης αλλοιώσεις στη FISH. Επιπλέον, οι ασθενείς είχαν συχνότερα συγγενείς α΄ βαθμού με ΧΛΛ ή ΧΛΥΝ (P<0,0001) ή/και είχαν εκτεθεί σε πετρελαιοειδή (P<0,0001), φυτοφάρμακα (P<0,0001) και ιονίζουσα ακτονοβολία σε σχέση με τους μάρτυρες. Αυτοί που είχαν εκτεθεί σε φυτοφάρμακα και καουτσούκ έφεραν συχνότερα del(11q) (P= 0,050) και del(13q) (P= 0,044) αντίστοιχα, ενώ όσοι είχαν οικογενειακό ιστορικό έφεραν συχνότερα del(11q) (P<0,0001), del(13q) (P=0.034), +12 (P=0.014). ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ: Αναδείχτηκε η τάση της ΧΛΛ να εμφανίζεται συχνότερα και σε νεότερες ηλικίες. Ο νέος συνδυασμός DSP30/IL-2 αποδείχθηκε καταλληλότερος για την in vitro διέγερση των ΧΛΛ κυττάρων σε σχέση με το ΤΡΑ. Ο καρυότυπος ανέδειξε ποικιλία χρωμοσωμικών αλλοιώσεων συμπεριλαμβανομένου και σπανιότερων. Η FISH ανέδειξε τις υπομικροσκοπικές αλλοιώσεις της νόσου. Καρυότυπος και FISH πρέπει να εφαρμόζονται παράλληλα για τη διερεύνηση της ΧΛΛ. Ο πολυμορφισμός UGT1A1*28 ενδέχεται να αποτελεί έναν από τους πιθανούς προδιαθεσικούς παράγοντες για τις περιπτώσεις της ΧΛΛ με +12 ή/και del(11)(q22). Η εκδήλωση της νόσου σχετίστηκε θετικά με το οικογενειακό ιστορικό, την έκθεση στα πετρελαιοειδή, την ιονίζουσα ακτινοβολία και τα φυτοφάρμακα. Το οικογενειακό ιστορικό ενδέχεται να σχετίζεται με τις αλλοιώσεις del(11q), del(13q) και + 12, ενώ η έκθεση στα φυτοφάρμακα και το καουτσούκ με del(11q) και del(13q) αντιστοίχως.