Ανίχνευση του ιού των ανθρωπίνων θηλωμάτων (HPV) σε ιστολογικά παρασκευάσματα διαφόρων κλινικών μορφών δερματικού κακοήθους μελανώματος στον ελληνικό πληθυσμό

Abstract

In this dissertation the correlation between the existence of human papilloma virus HPV in histological preparations of cutaneous malignant melanoma in Greek population was investigated. Indications in other research studies encouraged the accomplishment of this research, using classic and contemporary HPV detection methods and techniques.Cutaneous malignant melanoma is a very aggressive disease which has very low life expectancy and it occurs due to many reasons such as genetic predisposition, environmental factors as exposure to UVA/UVB radiation and other parameters. This cancer develops due to mutations in pre-oncogenes and suppressor genes which have cumulative impact on human organism. Final result of this cumulative act is the failure of cell repair mechanisms to repair the total damage caused to the cells and the development of cutaneous malignant melanoma.There are several ways to confront the cutaneous malignant melanoma but the disease is not curable after a certain point of development. The basic tools that nowadays doctors have to confront the cutaneous malignant melanoma is the prognosis, the prevention as well as the surgical extraction, the biological therapies and the chemotherapies or more often a combination of the above.The material and techniques used for the isolation of HPV from parafin embedded histological preparations of cutaneous malignant melanoma was a DNA extraction kit, which used proteinase K. DNA samples were amplified by primers MY09, MY11 and PCR and the PCR products were transferred to agarose gels, where current was applied. Finally, the gels were photographed under a transilluminator device.Having used the techniques of the protocol, the results of the research showed that HPV was not detected in the histological preparations. 32 samples from cutaneous malignant melanoma histological preparations were analysed. The age class of the participant patients was 22-92 years old and malignant melanoma was found in various body sites and in the head. 37,5% of the samples were female and 62,5% were male.The conclusion from the study is that there is no correlation of human papilloma virus (HPV) and cutaneous malignant melanoma in the histological preparations of Greek population analysed, although previous studies showed indications of HPV and cutaneous malignant melanoma correlation. The most significant parameter of malignant melanoma development remains UV radiation, mutations in CDKN2A gene with the presence of MC1R gene polymorphisms, but further investigation of the etiology of cutaneous malignant melanoma is necessary.

Στην παρούσα διδακτορική διατριβή ερευνήθηκε η συσχέτιση της ύπαρξης του ιού των ανθρωπίνων θηλωμάτων HPV με το κακόηθες δερματικό μελάνωμα σε ιστολογικά παρασκευάσματα στον ελληνικό πληθυσμό. Η ύπαρξη ενδείξεων από άλλες μελέτες ερευνητών έδωσε το κίνητρο για την πραγματοποίηση αυτής της μελέτης χρησιμοποιώντας τις σύγχρονες κλασικές μεθόδους για την ανίχνευση των υποτύπων του ιού HPV.Το κακόηθες δερματικό μελάνωμα είναι μία πάρα πολύ επιθετική νόσος που έχει πολύ χαμηλό προσδόκιμο ζωής και οφείλεται σε πλειάδα παραγόντων όπως η γενετική προδιάθεση, η έκθεση σε περιβαλλοντικούς παράγοντες όπως η ακτινοβολία UVA/UVB καθώς και άλλες παραμέτρους. Ο καρκίνος αυτός οφείλεται σε μεταλλάξεις πρωτο-ογκογονιδίων καθώς και ογκοκατασταλτικών γονιδίων που έχουν αθροιστική και συσσωρευτική δράση με τελικό αποτέλεσμα την ανικανότητα των κυττάρων να επιδιορθώσουν τις βλάβες. Συνέπεια αυτού σε τελικό στάδιο είναι η εμφάνιση του κακοήθους μελανώματος του δέρματος.Υπάρχουν πολλοί τρόποι αντιμετώπισης του κακοήθους δερματικού μελανώματος αλλά μετά από κάποιο στάδιο η νόσος δεν είναι ιάσιμη. Οι τρόποι αντιμετώπισης που εφαρμόζονται σήμερα αφορούν στην πρόγνωση και στην πρόληψη της νόσου σε πρώτο στάδιο, στις χειρουργικές επεμβάσεις, στην ανοσοθεραπεία και στη χημειοθεραπεία καθώς και στο συνδυασμό τους στην φάση ανάπτυξης της νόσου.Οι τεχνικές και οι μέθοδοι που χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση του DNA από τα ιστολογικά παρασκευάσματα παραφίνης, ήταν η χρήση της τεχνολογίας ενός κιτ απομόνωσης DNA, το οποίο βασίστηκε στην κατεργασία των τομών των δειγμάτων με πρωτεϊνάση Κ. To DNA ενισχύθηκε μέσω των εκκινητών MY09 και MY11 και της PCR και μεταφέρθηκε σε πηκτώματα αγαρόζης που εφαρμόστηκε τάση για το διαχωρισμό του. Μετά την ηλεκτροφόρηση τα πηκτώματα μεταφέρθηκαν σε transilluminator και φωτογραφήθηκαν.Στις τομές των δειγμάτων των ιστολογικών παρασκευασμάτων που εφαρμόστηκαν οι τεχνικές και οι μέθοδοι του πρωτοκόλλου της έρευνας αυτής της διδακτορικής διατριβής, δεν ανιχνεύθηκε ο ιός HPV. Αναλύθηκαν τα ιστολογικά παρασκευάσματα 32 ασθενών με κακόηθες δερματικό μελάνωμα ηλικίας από 22-92 ετών που εμφάνιζαν την ασθένεια σε διάφορα μέρη του σώματος και της κεφαλής. Το 37,5% των δειγμάτων ήταν γυναίκες και το 62,5% άνδρες.Τα συμπεράσματα που εξήχθησαν από τη μελέτη αυτή είναι ότι δεν υπάρχει συσχέτιση ανάμεσα στον ιό HPV και το δερματικό κακόηθες μελάνωμα στα ιστολογικά παρασκευάσματα του ελληνικού πληθυσμού που μελετήθηκαν, παρ’ ότι υπήρχαν ενδείξεις από προγενέστερες μελέτες ότι ο ιός HPV και το δερματικό κακόηθες μελάνωμα συσχετίζονται. Το σημαντικότερο ρόλο στην ανάπτυξη του κακοήθους δερματικού μελανώματος εξακολουθεί να παίζει η υπεριώδης ηλιακή ακτινοβολία καθώς και οι μεταλλάξεις του γονιδίου CDKN2A με την συνύπαρξη πολυμορφισμών στο γονίδιο MC1R, περαιτέρω όμως μελέτες για την ανάλυση της αιτιοπαθογένειας του κακοήθους δερματικού μελανώματος είναι αναγκαίες.