Ο ρόλος του γονιδίου και της πρωτεΐνης TACI σε ασθενείς με σαρκοείδωση

Abstract

OBJECTIVE The pathogenesis of sarcoidosis is presumed to be dictated by enhanced T cell immunity deregulation, however studies have suggested that patients with sarcoidosis exhibit an augmented humoral immune response manifested by increased amount of circulating immunoglobulins and the presence of autoantibodies. However the pathogenetic involvement of B cells in the development of sarcoidosis is poorly investigated. B cell homeostasis is largely influenced by B cell Activating Factor (BAFF) that acts through BAFF receptor (BAFFR) and Transmembrane Activator and Calcium-modulator and cyclophilin ligand interactor (TACI). The goal of this study was to determine the subpopulation distribution of peripheral blood B cells, the levels of TACI and BAFFR expression in B cells and immunoglobulins levels in patients with sarcoidosis.SAMPLES Seventy one sarcoidosis patients and an equivalent number of control subjects were enrolled in the study.METHODS The expression levels of the TACI and BAFFR receptors, through monoclonal antibodies anti-CD267 (clone: 1a1, BioLegend) and anti-CD268 (clone: 11C1, BioLegend) respectively, and the immunophenotyping of peripheral blood cells were estimated by flow cytometry. The detection of V220A, P251L variants of TNFRSF13B/TACI, was performed by PCR-RFLP protocol. The concentration of immunoglobins was determined by immunonephelometry. Statistical analyses were performed by the non-parametric Mann-Whitney and the Spearman correlation tests, using the SPSS (v10.0) software. RESULTS Absolute numbers and percentages of class-switched (CD19+CD27+IgD-) and unswitched (CD19+CD27+IgD+) memory B cells were significantly decreased while frequency of naive (CD19+CD27-IgD+) B cells was significantly increased. TACI and BAFFR expression did not differ between patients and controls, while a significant reduction of T and B lymphocyte count was found and was not related to medical treatment.CONCLUSION Our findings suggest disturbed homeostasis in peripheral B cells in patients with sarcoidosis. Further functional studies addressing TACI and BAFFR signalling pathway are needed in order to elucidate their role in the pathogenesis of sarcoidosis.

ΣΚΟΠΟΣ Η παθογένεια της σαρκοείδωσης θεωρείται ότι καθορίζεται από την απορρύθμιση της Τ κυτταρικής ανοσίας. Παρόλα αυτά, μελέτες έχουν δείξει ότι ασθενείς με σαρκοείδωση παρουσιάζουν αυξημένη χυμική ανοσιακή απάντηση η οποία χαρακτηρίζεται από αυξημένο αριθμό κυκλοφορούντων ανοσοσφαιρινών και αυτόαντισωμάτων. Ωστόσο, η συμμετοχή των Β-κυττάρων στην παθογένεια της σαρκοείδωσης δεν έχει διερευνηθεί επαρκώς. Η ομοιόσταση των Β-κυττάρων επηρεάζεται σε μεγάλο βαθμό από τον παράγοντα ενεργοποίησης των Β-κυττάρων (BAFF) ο οποίος δρά μέσω του υποδοχέα BAFF (BAFFR) και του διαμεμβρανικού ενεργοποιητή και ρυθμιστή ασβεστίου και του αλληλεπιδρών με τον συνδέτη κυκλοφιλίνης (TACI). Σκοπός της μελέτης ήταν ο καθορισμός της κατανομής των υποπληθυσμών των περιφερικών Β-κυττάρων στο αίμα, ο καθορισμός της έκφρασης των TACI και BAFFR στα Β-κύτταρα, καθώς και των επιπέδων των ανοσοσφαιρινών σε ασθενείς με σαρκοείδωση.ΥΛΙΚΟ Εβδομήντα ένας ασθενείς με σαρκοείδωση και αντίστοιχος αριθμός υγιών εθελοντών συμπεριλήφθηκαν στην μελέτη. Συλλέχθηκε περιφερικό αίμα κατά την ένταξή τους στη μελέτη. Από όλα τα άτομα της μελέτης απομονώθηκε γενετικό υλικό καθώς και ορός.ΜΕΘΟΔΟΙ Η έκφραση των υποδοχέων TACI και BAFFR, μέσω των μονοκλωνικών αντισωμάτων αντι-CD267 (Abcam, κλώνος:1α1) και αντι-CD268 (Clone:11C1, BioLegend), καθώς και ο ανοσοφαινοτυπικός χαρακτηρισμός των κυττάρων του περιφερικού αίματος πραγματοποιήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Η ανίχνευση των παραλλαγών V220A, P251L του γονιδίου TNFRSF13B/TACI έγινε με πρωτόκολλο PCR-RFLP. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης των ανοσοσφαιρινών έγινε με ανοσονεφελομετρία. Η αναζήτηση συσχετίσεων έγινε με τη χρήση μονοπαραγοντικής λογιστικής παλινδρόμησης. Η σύγκριση των συνεχών μεταβλητών έγινε με μη παραμετρική δοκιμασία U των Mann-Whitney και τον συντελεστή συσχέτισης r κατά Spearman, με τη χρήση του λογισμικού προγράμματος SPSS (v10.0). ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Οι απόλυτοι αριθμοί και τα ποσοστά των μνημονικών Β-κυττάρων που έχουν (CD19+CD27+IgD-) ή δεν έχουν μετέλθει ισοτυπική μεταστροφή (CD19+CD27+IgD+) βρέθηκαν να είναι σημαντικά μειωμένοι, ενώ η συχνότητα των παρθένων (CD19+CD27-IgD+) Β-κυττάρων βρέθηκε να είναι σημαντικά αυξημένη. Η έκφραση του TACI και του BAFFR δεν παρουσίασε διαφορά ανάμεσα στους ασθενείς και στους υγιείς εθελοντές ενώ παρατηρήθηκε μια σημαντική μείωση στον απόλυτο αριθμό των Τ και Β-κυττάρων η οποία δεν σχετιζόταν με την θεραπευτική αγωγή.ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν διαταραγμένη ομοιόσταση των περιφερικών B-κυττάρων σε ασθενείς με σαρκοείδωση. Αναγκαίες κρίνονται περαιτέρω λειτουργικές μελέτες πάνω στο σηματοδοτικό μονοπάτι των TACI και BAFFR, έτσι ώστε να αποσαφηνιστεί ο ρόλος τους στην παθογένεια της σαρκοείδωσης.