Επιδημιολογική και ανοσολογική μελέτη ασθενών με γλοιώματα του ΚΝΣ

Abstract

Aim: To investigate the cellular and humoral immunity status of gliomas, and their association with the WHO grading system and Overall Survival. Material and Methods: We have conducted a case-control study of 49 patients with gliomas and 30 healthy controls referred to the University Hospital of Ioannina. Blood sample was undertaken preoperative. We used ELISA assays to estimate IL2, IL10, IL16, TNF-a, granzyme-b, IgM, IgG, IgA, IgE, CMV IgM and IgG, EBV IgM and IgG, and toxoplasma gondii IgM and IgG. In addition, we evaluated C3 and C4 complement (radial immunodiffusion), ANA (indirect immunofluorescence), RF (Latex test), ENA (ELISA and line immunoassay), anti-dsDNA (ELISA), and anti-cardiolipin antibodies (ELISA). Flow cytometry was performed to measure CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56 positive cells and ratio CD4/CD8. Results: Patients with glioma had significantly reduced amounts of IL2 (p=0.000), TNFa (p=0.033), IgG(p=0.011), IgA(p=0.027), C4 (p=0.026), CD3 (p=0.001), CD4 (p=0.000), CD8 (p=0.002), ratio CD4/CD8 (p=0.000), CD19 (p=0.04) and elevated IL10 (p=0.05) compared with healthy controls. No statistically significant differences were observed concerning viral agents, total NK-cells, IgM, IL16, granzyme-b, RF, ANA, ENA, anti-dsDNA and anti-cardiolipin antibodies. A higher WHO grade was associated with decreased number of CD3 (p=0.011), CD4 (p=0.015), CD8 (p=0.048) and ratio CD4/CD8 (p=0.027), as well as with decreased IL2 (p=0.018), C4 (p=0.02), and IgG (p=0.05). CD4 counts and IL2 values are independent significant predictors of WHO grade. Beneficial prognostic factors are younger age at diagnosis (p=0.020), surgical resection vs biopsy (p=0.042), adjuvant chemo (p=0.028) and radiotherapy (p=0.002) and CD4 counts over 200 /mm3 (p=0.001). Various interactions between the counterparts of the immune system were revealed. CD4 counts over 200 /mm3 is a independent beneficial prognostic factor of overall survival. Conclusions: A shift from Th1 to Th2, a CD3 and CD19 lymphocytopenia, a diminished fraction CD4/CD8 and a reduced amount of immunoglobulins and complement were observed in the patients with gliomas. A higher WHO grade of the tumor was associated with greater impairments of immunity. CD4 counts and IL2 values are independent significant predictors of WHO grade.CD4 counts correlate inversely with a better outcome of patients with GBM. Defects of the humoral and cellular immunity were equally observed. A preoperative evaluation of the immune system of patients with gliomas is being proposed.

Σκοπός: Η διερεύνηση της κυτταρικής και χυμικής ανοσίας των ασθενών με γλοιώματα και η εύρεση πιθανών συσχετίσεων μεταξύ των στοιχείων του ανοσολογικού συστήματος καθώς και των τελευταίων με το σύστημα ιστολογικής κατάταξης του WHO και την επιβίωση των ασθενών. Υλικό και Μέθοδος : Διεξάγαμε μια case-control μελέτη, που αποτελούνταν από 49 ασθενείς που χειρουργήθηκαν στη Νευροχειρουργική Κλινική του ΠΝ Ιωαννίνων και 30 υγιείς μάρτυρες. Η αιμοληψία (30 ml) έγινε προεγχειρητικά. Χρησιμοποιήσαμε ELISA για τον ποσοτικό προσδιορισμό των IL2, IL10, IL16, TNF-a, granzyme-b, IgM, IgG, IgA, IgE, CMV IgM και IgG, EBV IgM και IgG, toxoplasma gondii IgM και IgG, anti-dsDNA, ENA και αντισώματα αντι-καρδιολιπίνης. Επιπρόσθετα αξιολογήσαμε τους παράγοντες C3 και C4 του συμπληρώματος μέσω ακτινωτής ανοσοδιάχυσης, ΑΝΑ με έμμεση, RF μέσω Latex test. Κυτταρομετρία ροής εφαρμόστηκε για τον καθορισμό των CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56 θετικών κυττάρων και κλάσματος CD4/CD8. Αποτελέσματα: Οι ασθενείς με γλοιώματα παρουσιάζουν μειωμένες τιμές των IL2 (p=0.000), TNFa (p=0.033), IgG(p=0.011), IgA(p=0.027), C4 (p=0.026), CD3 (p=0.001), CD4 (p=0.000), CD8 (p=0.002), κλάσμα CD4/CD8 (p=0.000), CD19 (p=0.04) και αυξημένες για IL10 (p=0.05) σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. Δεν παρατηρήθηκε κάποια στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ ασθενών και μαρτύρων σχετικά με τους μικροβιακούς παράγοντες, ολικά NK-κύτταρα, IgM, IL16, granzyme-b, RF, ANA, ENA, anti-dsDNA και αντισώματα της αντικαρδιολιπίνης. Ο υψηλότερος βαθμός WHO grade σχετίζεται με μειωμένο αριθμό των CD3 (p=0.011), CD4 (p=0.015), CD8 (p=0.048) του κλάσματος CD4/CD8 (p=0.027), όπως επίσης με μειωμένες τιμές IL2 (p=0.018), C4 (p=0.02) και IgG (p=0.05). Οι αριθμοί CD4 και οι τιμές της IL2 αποτελούν σημαντικούς παράγοντες πρόβλεψης του βαθμού κακοήθειας κατά WHO. Ευνοϊκοί προγνωστικοί παράγοντες είναι η νεότερη ηλικία κατά τη διάγνωση (p=0.020), χειρουργική αφαίρεση vs στερεοτακτικής βιοψίας (p=0.042), συμπληρωματική χημειοθεραπεία (p=0.028) και ακτινοθεραπεία (p=0.002), καθώς και αριθμός CD4 θετικών κυττάρων άνω των 200 /mm3 (p=0.001). Ο τελευταίος αποτελεί και ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα επιβίωσης. Επίσης παρατηρούνται διάφορες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των δομών του ανοσολογικού συστήματος. Συμπεράσματα: Μια στροφή από την Th1 προς την Th2 αντίδραση, μια τόσο CD3 όσο και CD19 λυμφοπενία, μειωμένο κλάσμα CD4/CD8 και μειωμένος αριθμός ανοσοσφαιρινών και συμπληρώματος παρατηρούνται στους ασθενείς με γλοιώματα. Υψηλότερο WHO grade σχετίζεται με μεγαλύτερες ελλείψεις της ανοσίας. Οι τελευταίες είναι παρούσες τόσο στη χυμική όσο και στην κυτταρική ανοσία. Η ποσότητα των CD4 και οι τιμές της IL2 αποτελούν σημαντικούς παράγοντες πρόβλεψης του βαθμού κακοήθειας κατά WHO. Ο αριθμός των CD4 θετικών κυττάρων σχετίζεται αντίστροφα με μια καλύτερη επιβίωση ασθενών με γλοιοβλάστωμα. Προτείνουμε μια προεγχειρητική αξιολόγηση του ανοσολογικού συστήματος σε ασθενείς με γλοιώματα.

Ziel: Die Reserche der zellulären und humoralen Immunität von Gliomen und der Korrelationen zwischen der o.g. Komponenten und des WHO Grades sowie des Überlebens. Material und Methoden: Wir haben eine case-control Studie durchgeführt, die aus 49 Gliompatienten und 30 gesunden Kontrollpatienten besteht. Die Patienten wurden an einem Gliom in der neurochirugischen Abteilung der Uni-Klink von Ioannina operiert. Die Blutabnahme (30 ml) hat präoperativ stattgefunden. Wir evaluierten IL2, IL10, IL16, TNF-a, Granzyme-b, IgM, IgG, IgA, IgE, CMV IgM, CMV IgG, EBV IgM, EBV IgG, Toxoplasma gondii IgM, Toxoplasma gondii IgG, ENA, anti-cardiolipin Antikörpern, anti ds-DNA mittels ELISA, C3 und C4 mittels Immunodiffusion, Rf mittels Latex test, und ANA mittels Immunofluorence. Weiterhin, Fluß Zytometrie war durchgeführt zur Evaluation von CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56 positive Zellen und Ratio CD4/CD8. Ergebnisse: Gliompatienten verfügen über statistisch reduzierte Werte von IL2 (p=0.000), TNFa (p=0.033), IgG(p=0.011), IgA(p=0.027), C4 (p=0.026), CD3 (p=0.001), CD4 (p=0.000), CD8 (p=0.002), Ratio CD4/CD8 (p=0.000), CD19 (p=0.04) und höhere Werte von IL10 (p=0.05) im Vergleich zu den Kontrollen. Keine signifikante Unterschiede bezüglich viralen Faktoren, totalen NK-Zellen, IgM, IL16, granzyme-b, RF, ANA, ENA, antidsDNA und anti-cardiolipin Antikörpern. Je höher der WHO Grad ist, desto geringer sind die Werte von CD3 (p=0.011), CD4 (p=0.0015), CD8 (p=0.048) und Ratio CD4/CD8 (p=0.027), IL2 (p=0.018), C4 (p=0.02), und IgG (p=0.05). CD4 und IL2 sind signifikante Prädiktoren des WHO Grades. Günstige prognostische Faktoren sind jungeres Alter (p=0.020), Resektion vs Biopsie (p=0.042), adjuvante Chemotherapie (p=0.028) und Radiatio (p=0.002) und CD4 Menge über 200 /mm3 (p=0.001). CD4 Menge ist ein unabhängiger prognostischer Faktor von Überleben. Verschiedene Korrelationen zwischen den Komponenten des Immunsystems wurden festgestellt. Schlußfolgerung: Ein Verschiebung der Th1 zur Th2 Reaktion, eine CD3 und CD19 Lymphozytopenie, ein reduziertes Verhältnis CD4/CD8 und reduzierte Immunoglobulinen und Complement sind in Gliompatienten vorhanden. Ein höherer WHO Grad korreliert mit größeren Defiziten der Immunität. CD4 und IL2 sind signifikante Prädiktoren des WHO Grades. Die CD4 Zellenmenge korreliert negativ mit einem besseren Outcome.Sowohl zelluläre als auch hymorale Defizite finden statt. Eine präoperative laborparametrische Evaluation des Immunsystems der Gliompatienten wird vorgeschlagen.