Μελέτη της προσαρμογής ενζύμων σε χαμηλές θερμοκρασίες: βιοχημική μελέτη δύο χιτινασών από το ψυχρόφιλο βακτήριο Arthrobacter sp str. TAD20

Περίληψη

Στην προσπάθεια μας να μελετήσουμε την επίδραση της τοπικής ευκαμψίας στην προσαρμογή των ενζύμων σε χαμηλές θερμοκρασίες σχεδιάσαμε σημειακές μεταλλάξεις με στόχο την μεταβολή της ευκαμψίας των πλευρικών ομάδων των αμινοξέων στο ενεργό κέντρο της αλκαλικής φωσφατάσης από το στέλεχος TAB5. Οι μεταλλάξεις βασίστηκαν σε πολλαπλές στοιχίσεις αλληλουχιών και την βοήθεια μοντέλου της τρισδιάστατης δομής. Οι μεταλλάξεις έγιναν στα κατάλοιπα Trp-260 και Ala-219 του καταλυτικού κέντρου και His-135 του σημείου πρόσδεσης του ιόντος Mg2+. Η αντικατάσταση της Trp-260 από Lys στη μεταλλαγμένη πρωτεΐνη W260K οδήγησε σε ένα λιγότερο ενεργό, συγκριτικά με το φυσικό ένζυμο, στο εύρος θερμοκρασιών 5-25°C. Η συμπληρωματική αντικατάσταση της Ala-219 από Asn στο διπλά μεταλλαγμένο ένζυμο W260K/A219N, οδηγεί σε δραστική αύξηση της ενέργειας ενεργοποίησης που αντικατοπτρίζεται στην μειωμένη ενεργότητα σε θερμοκρασίες 5-15°C και μια σημαντική αύξηση της ενεργότητας στους 20-25°C. Περεταίρω αντικατάσταση της H ...
περισσότερα

Περίληψη σε άλλη γλώσσα

In order to explore the effects of local flexibility on the cold adaptation of enzymes, we designed point mutations aiming to modify side chain flexibility at the active site of the psychrophilic alkaline phosphatase from the Antarctic strain TAB5. The mutations were designed based on multiple sequence alignment, assisted by a homology based model. The mutagenesis targets were residues Trp-260 and Ala-219 of the catalytic site and His-135 of the Mg2+ binding site. The replacement of Trp-260 by Lys in mutant W260K, resulted in a less active than the wild-type enzyme in the temperature range 5-25°C. The additional replacement of Ala-219 by Asn in the double mutant W260K/A219N, resulted in a drastic increase in the energy of activation which is reflected in a considerably decreased activity at temperatures 5- 15°C and a significantly increased activity at 20-25°C. Further substitution of His135 by Asp in the triple mutant W260K/A219N/H135D restored the low energy ofactivation. In addition ...
περισσότερα
Πρέπει να είστε εγγεγραμένος χρήστης για έχετε πρόσβαση σε όλες τις υπηρεσίες του ΕΑΔΔ  Είσοδος /Εγγραφή

Όλα τα τεκμήρια στο ΕΑΔΔ προστατεύονται από πνευματικά δικαιώματα.

DOI
10.12681/eadd/13465
Διεύθυνση Handle
http://hdl.handle.net/10442/hedi/13465
ND
13465
Εναλλακτικός τίτλος
Study of enzymes cold adaption: biochemical study of two chitinases from the psychrophilic bacterium Arthrobacter sp. str. TAD20
Συγγραφέας
Μαυρομμάτης, Κωνσταντίνος
Ημερομηνία
2002
Ίδρυμα
Πανεπιστήμιο Κρήτης. Σχολή Θετικών Επιστημών. Τμήμα Βιολογίας. Εργαστήριο Ενζυμικής Βιοτεχνολογίας
Εξεταστική επιτροπή
Μπουριώτης Βασίλειος
Κοκκινίδης Μιχάλης
Πανόπουλος Νίκος
Οικονόμου Αναστάσιος
Παπαματθαιάκης Ιωσήφ
Βοργιάς Κωνσταντίνος
Αλεξανδράκη Δέσποινα
Επιστημονικό πεδίο
Φυσικές Επιστήμες
Βιολογικές Επιστήμες
Λέξεις-κλειδιά
Χιτινάση; Αλκαλική φωσφατάση; Ψυχροφιλικότητα; Κατευθυνόμενη μεταλλαξογένεση; Βακτήρια
Χώρα
Ελλάδα
Γλώσσα
Ελληνικά
Άλλα στοιχεία
vi, 138 σελ., εικ.