ΜΕΛΕΤΕΣ ΣΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΣΕΡΙΝΟ - ΥΔΡΟΞΥΜΕΘΥΛΟΤΡΑΝΣΦΕΡΑΣΗ (SHMT)

Abstract

SERINE - HYDROXYMETHYLTRANSFERASE CATALYSES THE REVERSIBLE INTERCONVERSION OF SERINE AND GLYCINE WITH THE PARTICIPATION OF THE COENZYMES PYRIDOXAL - 5 - PHASPHATE (PLP) AND TETRAHYDROFOLIC ACID (THFA). THIS STUDY CONSISTS OF TWO EXPERIMENTAL SECTIONS. SECTION ONE IS CONCERNED WITH THE ISOLATION AND PURIFICATION OF THE ENZYME TO HOMOGENEITY FROM CALF LIVERCYTOSOL (SSHMT) AND MITOCHONDRIA (MSHMT). SECTION TWO OF THIS RESEARCH DEALS WITH THE STUDY OF THE TWO SHMT ISOENZYMES AND AIMS AT A DEEP UNDERSTANDING OF THEIR ACTION. THE AIM OF ISOLATION AND PURIFICATION OF THIS ENZYME IN THE PRESENT THESIS WAS TO STUDY THE PARAMETERS THAT WOULD ADD FURHTER INFORMATION ON ITS PROPERTIES AND FUNCTION, SO AS TO CLARIFY ITS ACTION AND PHYSIOLOGICAL ROLE IN THE CELL. THE PURIFICATION WAS VERY SATISFACTORY WITH PURIFICATION FOLD OF 189,4 FOR CSHMT AND 175,4 FOR MSHMT. ENZYME MOLECULAR WEIGHT WAS ESTIMATED AT 220,000 USING A SEPHADEX G- 200 CHROMATOGRAPHIC COLUMN. THE CSHMT AND MSHMT POLYPEPTIDE CHAIN MOLECULAR WEIGHT WAS DEFINED AT 50.000. IT WAS DEMONSTRATED THAT BOTH CSHMT AND MSHMTCONSIST OF FOUR IDENTICAL POLYPEPTIDE CHAINS, AS FAR AS THEIR MOLECULAR WEIGHT IS CONCERNED. PI 4,8 FOR CSHMT AND 5,2 FOR MSHMT. OPTIMUM PH WAS 7,3 AND THEOPTIMUM TEMPERATURE 37 C DEGREES. THE ENZYME MAINTAINS A MAXIMUM KINETIC ACTIVITY FOR AT LEAST THREE MONTHS AT A TEMPERATURE OF 4 C DEGREES. KINETIC STUDYOF THE TWO ISOENZYMES FOUND KM (ABSTRACT TRUNCATED)

Η ΥΔΡΟΞΥΜΕΘΥΛΟΤΡΑΝΣΦΕΡΑΣΗ ΤΗΣ ΣΕΡΙΝΗΣ (SHMT) ΚΑΤΑΛΥΕΙ ΤΗΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΜΕΤΑΤΡΟΠΗΣ ΤΗΣ ΣΕΡΙΝΗΣ ΣΕ ΓΛΥΚΙΝΗ ΜΕ ΤΗ ΣΥΜΜΕΤΟΧΗ ΤΩΝ ΣΥΝΕΝΖΥΜΩΝ ΦΩΣΦΟΡΙΚΗΣ ΠΥΡΙΔΟΞΑΛΗΣ (PLP) ΚΑΙ ΤΕΤΡΑΥΔΡΟΦΟΛΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ (THFA). Η ΕΡΓΑΣΙΑ ΑΥΤΗ ΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΕΙ ΔΥΟ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΑ ΜΕΡΗ. ΤΟ ΠΡΩΤΟ ΜΕΡΟΣ ΑΦΟΡΑ ΤΗΝ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ ΤΟΝ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΑΠΟ ΤΟ ΚΥΤΟΔΙΑΛΥΜΑ ΚΑΙ ΤΑ ΜΙΤΟΧΟΝΔΡΙΑ ΑΠΟ ΟΜΟΓΕΝΟΠΟΙΗΜΑ ΗΠΑΤΟΣ ΜΟΣΧΟΥ. ΤΟ ΔΕΥΤΕΡΟ ΜΕΡΟΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΑΥΤΗΣ ΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΕΙ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΔΥΟ ΙΣΟΕΝΖΥΜΩΝ ΤΗΣ SHMT ΓΙΑ ΤΗ ΠΛΗΡΕΣΤΕΡΗ ΚΑΤΑΝΟΗΣΗ ΤΟΥ ΤΡΟΠΟΥ ΔΡΑΣΗΣ ΤΗΣ. Η ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ Ο ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΣΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΕΓΙΝΕ ΜΕ ΣΚΟΠΟ ΝΑ ΜΕΛΕΤΗΘΟΥΝ ΟΛΕΣ ΕΚΕΙΝΕΣ ΟΙ ΠΑΡΑΜΕΤΡΟΙ ΠΟΥ ΘΑ ΠΡΟΣΕΘΕΤΑΝ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΓΙΑ ΤΙΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΚΑΙ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΟΥ, ΟΥΤΩΣ ΩΣΤΕ ΝΑ ΔΙΕΥΚΡΙΝΙΣΤΕΙ Ο ΤΡΟΠΟΣ ΔΡΑΣΗΣ ΚΑΙ Ο ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΤΟΥ ΡΟΛΟΣ ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ. Ο ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΗΤΑΝ ΠΟΛΥ ΙΚΑΝΟΠΟΙΗΤΙΚΟΣ ΟΠΩΣ ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟΝ ΣΥΝΤΕΛΕΣΤΗ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ (189,4 ΓΙΑ ΤΗΝ CSHMT ΚΑΙ 175,4 ΓΙΑ ΤΗΝ MSHMT). ΤΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ ΥΠΟΛΟΓΙΣΘΗΚΕ ΣΤΙΣ 220.000 ΜΕ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΗ ΣΤΗΛΗ G - 200 . ΕΠΙΣΗΣΤΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΒΑΡΟΣ ΤΩΝ ΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΚΩΝ ΑΛΥΣΙΔΩΝ ΤΗΣ CSHMT ΚΑΙ MSHMT ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΘΗΚΕ ΣΤΙΣ 50.000. ΑΠΟΔΕΙΧΘΗΚΕ ΟΤΙ ΤΟΣΟ Η CSHMT ΚΑΙ Η MSHMT ΑΠΟΤΕΛΟΥΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΕΣΣΕΡΙΣ ΟΜΟΙΕΣ ΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΚΕΣ ΑΛΥΣΙΔΕΣ, ΟΣΟΝ ΑΦΟΡΑ ΤΟ ΜΟΡΙΑΚΟ ΤΟΥΣ ΒΑΡΟΣ. PΙ 4,8 ΓΙΑ CSHMT ΚΑΙ 5,2 ΓΙΑ MSHMT. ΤΟ ΒΕΛΤΙΣΤΟ PH 7,3 ΚΑΙ Η ΒΕΛΤΙΣΤΗ ΘΕΡΜΟΚΡΑΣΙΑ 37 ΒΑΘΜΟΙ C. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΔΙΑΤΗΡΕΙ ΤΟ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΟ ΠΟΣΟΣΤΟ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)