ΔΟΜΗ ΚΑΙ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΜΙΑΣ ΦΥΤΙΚΗΣ Β - ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΗΣ: ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΓΟΝΙΔΙΑΚΗΣ ΤΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΗΣ

Abstract

ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΑΥΤΗΣ ΗΤΑΝ Η ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΜΙΑΣ ΟΞΙΝΗΣ Β - ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΗΣ ΠΟΥ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΑΠΟ ΣΠΟΡΟΥΣ ΚΡΙΘΑΡΙΟΥ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΜΙΑ ΜΕΓΑΛΗ (45 KDA) ΚΑΙ ΜΙΑ ΜΙΚΡΗ (33 KDA) ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ, ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΔΕ ΠΟΛΛΑΠΛΕΣ ΙΣΟΜΟΡΦΕΣ. Η ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΑ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΤΗΣ ΜΙΚΡΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ ΔΕΝ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΕ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΠΡΩΤΕΟΛΥΣΗΣ, ΟΥΤΕ ΣΤΗ Ν - ΓΛΥΚΟΣΥΛΙΩΣΗ ΤΗΣ ΜΙΚΡΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ, ΠΟΥ ΗΤΑΝ Η ΜΟΝΗ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΣΗ ΠΟΥ ΑΝΙΧΝΕΥΤΗΚΕ. ΟΙ ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΕΣ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΚΑΙ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΟΥ ΣΗΜΕΙΟΥ ΣΥΝΔΕΟΝΤΑΙ. ΣΤΗΝ ΤΕΛΕΥΤΑΙΑ ΣΥΜΜΕΤΕΧΕΙ ΙΣΩΣ ΚΑΙ Η ΑΓΝΩΣΤΟΥ ΑΙΤΙΑΣ, ΕΤΕΡΟΓΕΝΕΙΑ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΟΥ ΣΗΜΕΙΟΥ ΤΗΣ ΜΕΓΑΛΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΔΡΑ ΩΣ ΕΤΕΡΟΔΙΜΕΡΕΣ. ΑΠΟΔΙΑΤΑΣΣΕΤΑΙ ΑΝΤΙΣΤΡΕΠΤΑ ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΙΣΧΥΡΩΝ ΑΠΟΔΙΑΤΑΚΤΙΚΩΝ. Ο ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΣ ΟΜΩΣ ΤΩΝ ΥΠΟΜΟΝΑΔΩΝ ΟΔΗΓΕΙ ΣΕ ΜΗ ΑΝΤΙΣΤΡΕΠΤΗ ΑΠΟΔΙΑΤΑΞΗ, ΠΙΘΑΝΟΝ ΛΟΓΩ ΜΗ ΕΠΑΝΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟΥ ΤΟΥ ΕΤΕΡΟΔΙΜΕΡΟΥΣ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΔΡΑ ΜΕΣΩ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΥ ΟΞΙΝΗΣ ΚΑΤΑΛΥΣΗΣ ΔΥΟ ΣΤΑΔΙΩΝ. Η ΠΥΡΗΝΟΦΙΛΗ ΟΜΑΔΑ ΚΑΙ Ο ΚΑΤΑΛΥΤΗΣ ΟΞΕΟΣ - ΒΑΣΕΩΣ ΕΙΝΑΙ ΚΑΡΒΟΞΥΛΙΚΑ ΑΜΙΝΟΞΕΑ. ΣΤΟ ΕΝΕΡΓΟ ΚΕΝΤΡΟ ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΕΠΙΣΗΣ Η ΣΥΜΜΕΤΟΧΗ ΜΙΑΣ ΙΣΤΙΔΙΝΗΣ ΚΑΙ ΜΙΑΣ ΑΡΓΙΝΙΝΗΣ. ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗΚΑΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ ΕΝΑΝΤΙ ΤΗΣ ΚΑΘΕ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ ΧΩΡΙΣΤΑ, ΠΟΥ ΑΝΑΓΝΩΡΙΣΑΝ ΚΑΙ ΑΛΛΕΣ ΦΥΤΙΚΕΣ Β - ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΕΣ. ΟΙ ΑΚΟΛΟΥΘΙΕΣ ΤΟΥ ΑΜΙΝΟΤΕΛΙΚΟΥ ΑΚΡΟΥ ΚΑΙ ΕΝΟΣ ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΥ ΠΕΠΤΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ΜΕΓΑΛΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΥΝ ΥΨΗΛΟΤΑΤΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΤΙΣ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΕΣ ΦΥΤΙΚΩΝ Β - ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΩΝ ΤΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ 35 ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΣΥΛΥΔΡΟΛΑΣΩΝ ΚΑΙ ΤΟ ΑΜΙΝΟΤΕΛΙΚΟ ΑΚΡΟ ΤΗΣ ΜΙΚΡΗΣ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑΣ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΑΣΘΕΝΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

THE GOAL OF THIS WORK WAS THE STUDY OF THE STRUCTURE AND PROPERTIES OF A Β - GALACTOSIDASE ISOLATED FROM BARLEY SEEDS. BARLEY Β - GALACTOSIDASE CONSISTS OFA LARGE (45 KDA) AND A SMALL (33 KDA) SUBUNIT. IT EXHIBITS BOTH CHARGE AND MASS HETEROGENEITY WHICH ARE CONNECTED. THE CAUSE OF THE SMALL SUBUNIT'S MASS HETEROGENEITY IS NEITHER PROTEOLYSIS, NOR THE ONLY POST - TRANSLATIONAL MODIFICATION DETECTED, NAMELY THE N - GLYCOSYLATION OF THE LARGER FORM OF THE SMALL SUBUNIT. THE CHARGE HETEROGENEITY OF THE LARGE SUBUNIT, WHOSE CAUSE IS UNKNOWN, MAY CONTRIBUTE TO THE HOLOENZYME'S CHARGE HETEROGENEITY. THE ENZYME IS ACTIVE IN THE FORM OF A HETERODIMER, WHICH UNFOLDS REVERSIBLY IN DENATURANTS. HOWEVER, SEPARATION OF THE SUBUNITS RESULTS IN IRREVERSIBLE LOSS OF ACTIVITY, PROBABLY DUE TO THE INABILITY TO REGAIN THE HETERODIMERIC STRUCTURE. Β - GALACTOSIDES WERE HYDROLYSED ACCORDING TO AN ACID CATALYSIS TWO STAGE MECHANISM. BOTHTHE ACID - BASE CATALYST AND THE NUCLEOPHILE ARE CARBOXYLIC AMINOACIDS. IN THE ACTIVE CENTER THE PARTICIPATION OF AN HISTIDINE AND AN ARGININE RESIDUE WAS ASCERTAINED. ANTISERA WERE PREPARED AGAINST EACH SUBUNIT SEPARATELY. THEY RECOGNISED VARIOUS PLANT Β - GALACTOSIDASES. THE AMINOTERMINAL SEQUENCE AND ANINTERNAL PEPTIDE SEQUENCE FROM PLANT Β - GALACTOSIDASES BELONGING TO FAMILY 35 OF THE GLUCOSYL - HYDROLASES. THE SMALL SUBUNIT'S AMINOTERMINAL SEQUENCE (ABSTRACT TRUNCATED)