ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥ ΕΠΙΔΕΡΜΙΔΙΟΥ ΤΟΥ ΕΝΤΟΜΟΥ CERATITIS CAPITATA

Abstract

ΣΤΗ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΑΥΤΗ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΤΟΥ ΕΠΙΔΕΡΜΙΔΙΟΥ ΤΟΥ ΤΡΙΤΟΥ ΠΡΟΝΥΜΦΙΚΟΥ ΣΤΑΔΙΟΥ ΤΟΥ ΕΝΤΟΜΟΥ CERATITIS CAPITATA. ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ SDS ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ, ΜΕ ΜΗ ΑΠΟΔΙΑΤΑΚΤΙΚΗ (NATIVE) ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΚΑΙ ΜΕ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΟΕΣΤΙΑΣΗ. Η ΜΕΛΕΤΗ ΜΑΣ ΕΣΤΙΑΣΤΗΚΕ ΚΥΡΙΩΣ ΣΤΙΣ ΧΑΜΗΛΟΥ ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΟΙΟΠΟΙΕΣ ΕΧΟΥΝ ΥΨΗΛΗ ΣΥΓΓΕΝΕΙΑ ΜΕ ΤΗ ΧΙΤΙΝΗ ΚΑΙ ΕΧΟΥΝ ΟΞΙΝΑ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΑ ΣΗΜΕΙΑ(4-6.0). ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΜΕ IN VITRO ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΠΕΡΙΒΛΗΜΑΤΩΝ, ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΥΤΕΣ ΣΥΝΘΕΤΟΝΤΑΙ ΑΠΟ ΤΑ ΕΠΙΔΕΡΜΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ. Η ΑΜΙΝΟΞΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥ ΕΠΙΔΕΡΜΙΔΙΟΥ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΜΕΓΑΛΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΤΗΝ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΗ ΑΠΟ ΤΟ ΕΝΤΟΜΟ DROSOPHILA MELANOGASTER. ΣΤΗ ΣΥΝΕΧΕΙΑ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΜΕΡΙΚΗΣ ΠΡΩΤΟΔΙΑΤΑΞΗΣ ΕΝΝΕΑ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥ ΕΠΙΔΕΡΜΙΔΙΟΥ. ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΥΤΕΣ ΜΕΤΑΑΠΟ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥΣ ΜΕ ΤΑ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΑ BESTFIT ΚΑΙ CLUSTAL ΔΕΙΧΤΗΚΕ ΟΤΙ ΠΙΘΑΝΟΝ ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΤΗΝ ΙΔΙΑ ΠΟΛΥΓΟΝΙΔΙΑΚΗ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑ. ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΤΩΝ ΜΕΡΙΚΩΝ ΠΡΩΤΟΔΙΑΤΑΞΕΩΝΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΤΟΥ ΕΠΙΔΕΡΜΙΟΥ ΤΟΥ C. CAPITATA ΜΕ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΕΠΙΔΕΡΜΙΔΙΩΝ ΑΛΛΩΝ ΕΝΤΟΜΩΝ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΟΛΕΣ ΑΥΤΕΣ ΑΝΗΚΟΥΝ ΠΙΘΑΝΟΝ ΣΤΗΝ ΙΔΙΑ ΠΟΛΥΓΟΝΙΔΙΑΚΗ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑ. ΣΤΗ ΣΥΝΕΧΕΙΑ ΔΗΜΙΟΥΡΓΗΘΗΚΕ ΓΟΝΙΔΙΑΚΗ ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ ΤΟΥ CERATITIS CAPITATA ΚΑΙ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ ΤΡΕΙΣ ΑΝΑΣΥΝΔΙΑΣΜΕΝΟΙ ΚΛΩΝΟΙ ΠΟΥ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΓΟΝΙΔΙΑ ΠΟΥ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΝ ΓΙ'ΑΥΤΕΣ ΤΙΣ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ. ΤΕΛΟΣ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΣΤΟΝ ΚΛΩΝΟ ΛCC 10.1.

THIS THESIS IS CONCERNED WITH THE CUTICULAR PROTEINS OF THE THIRD INSTAR LARVAE OF CERATITIS CAPITATA. THE ELECTROPHORETIC PATTERNS OF PROTEINS WAS STUDIEDBY SDS AND NATIVE POLYACRYLAMIDE GEL ELECTROPHORESIS AND ISOELECTRIC FOCUSING. OUR STUDY WAS FOCUSED ON LOW MOLECULAR WEIGHT PROTEINS THAT SHOW HIGH AFFINITY FOR THE CHITIN AND HAVE ACIDIC ISOELECTRIC POINTS.(4.5-6.0). IN VITRO CULTURE OF INTEGUMENTS SHOWED THAT THESE PROTEINS SYNTHESIZED FROM THE EPIDERMAL CELLS. AMINOACID ANALYSIS OF THE TOTAL CUTICULAR PROTEINS SHOWS A GREAT SIMILARITY WITH THE AMINOACID ANALYSIS OF CUTICLE PROTEINS OF THIRD INSTAR LARVAE OF DROSOPHILA MELANOGASTER. THE FOLLOWING STEP IN OUR STUDY WAS THE DETERMINATION OF PARTIAL PRIMARY STRUCTURE FROM NINE CUTICULAR PROTEINS. ANALYSED THESE SEQUENCES WITH THE PROGRAMMES BESTFIT AND CLUSTAL WE CONCLUDED THAT THESE PROTEINS ARE PROBABLY MEMBERS OF THE SAME MULTIGENE FAMILY. COMPARISON THESE SEQUENCES WITH SEQUENCES OF CUTICULAR PROTEINS FROM OTHER INSECTS SUGGEST THAT ALL THESE PROTEINS PROBABLY BELONG TO THE SAME MULTIGENE FAMILY. FINALLY A GENOMIC LIBRARY OF CERATITIS CAPITATA WAS CREATED. THREE RECOMBINANT CLONES THAT CONTAIN CUTICLE GENES WERE ISOLATED AND ONE CLONE (ΛCC 10.1) WAS MAPPED.