Μια σύγχρονη γενετική ανάλυση της ενδομητρίωσης στον Ελληνικό πληθυσμό

Abstract

INTRODUCTIONEndometriosis is a benign gynecologic disorder, affecting up to 10% of the women, characterized by the presence of functional endometrial tissue at ectopic positions generally within the peritoneum. It is a heritable condition influenced by multiple genetic and environmental factors, but there are populations or racial differences for endometriosis both in terms of genetic susceptibility and disease manifestations. AIM OF THE STUDYStudy question: Are single nucleotide polymorphisms (SNPs) rs7521902, rs10859871 and rs11031006, mapping to WNT4, VEZT and FSHB genetic loci, respectively, associated with risk for endometriosis in the Greek population? Moreover, the aim of the present study was to evaluate the association of two IL 16 gene single nucleotide polymorphisms (SNPs), rs4072111 and rs11556218, with the risk of endometriosis in women from Greece as well as to gain insight about the structural consequences of these two exonic SNPs regarding development of the disease.SUBJECTS AND METHODSIn this case-control association study, 316 women of Greek origin were enrolled, including 166 women with histological confirmed endometriosis diagnosed through surgery and 150 normal controls. Whole blood was collected pre operatively and genomic DNA was isolated from peripheral blood leukocytes by using a commercial kit. Genotyping of the rs7521902, rs10859871 and rs11031006 SNPs was performed with Taqman primer/probe sets, by using Real-Time PCR System. As far as IL-16 polymorphism is concerned, subjects were genotyped using a polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR RFLP) strategy.RESULTSA significant association was detected with the AC genotype of rs7521902 (WNT4) in patients with stage III/IV of disease only (P=0.036, OR=1.96, 95% CI 1.05-3.65). Evidence for association with endometriosis was also found for the AC genotype of the rs10859871 of VEZT (P=0.01, OR=0.39, 95% CI 0.19-0.81). Notably, a significant difference in the distribution of the AG genotype as well as the minor allele A of FSHB rs11031006 SNP was found between the endometriosis patients and controls (P=0.044, OR=0.55, 95% CI 0.31-0.98 and P=0.032, OR=0.55, 95% CI 0.32-0.95 for AG and A, respectively). A significant association was detected regarding the GG and GT genotype as well as 'G' allele of rs11556218 in patients with endometriosis. The rs4072111 SNP of the IL 16 gene was not found to be associated with an increased susceptibility to endometriosis CONCLUSIONSA genetic association between rs7521902 (WNT4) SNP and advanced endometriosis was found at genotypic level. Our results demonstrated that rs11556218 of IL 16 is associated with endometriosis in Greek women, probably by resulting in the aberrant expression of IL 16, as suggested by the bioinformatics analysis conducted on the SNP derived protein sequences, which indicated a possible association between mutation and functional modification of Pro IL 16.

Η ενδομητρίωση είναι μια καλοήθης γυναικολογική διαταραχή που επηρεάζει έως και το 10% των γυναικών και χαρακτηρίζεται από την παρουσία λειτουργικού ενδομήτριου ιστού σε έκτοπες θέσεις γενικά εντός του περιτοναίου. Πρόκειται για κληρονομική κατάσταση που επηρεάζεται από πολλαπλούς γενετικούς και περιβαλλοντικούς παράγοντες, ενώ υπάρχουν πληθυσμιακές/φυλετικές διαφορές αναφορικά με την ύπαρξη γενετικής συσχέτισης τόσον όσο αφορά την εκδήλωση της ασθένειας όσο και τη βαρύτητα αυτής (στάδια Ι-IV). ΣΤΟΧΟΣ Στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η αποκάλυψη πιθανής γενετικής συσχέτισης μεταξύ γενετικών πολυμορφισμών των γονιδίων WNT4, VEZT, FSHB και IL-16 και του κινδύνου ενδομητρίωσης σε γυναίκες από την Ελλάδα, καθώς και η προσέγγιση της λειτουργικής σημασίας κάποιων εξ αυτών των πολυμορφισμών αναφορικά με την ανάπτυξη της ενδομητρίωσης. ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙΣε αυτή την μελέτη γενετικής συσχέτισης συμμετείχαν 316 γυναίκες Ελληνικής καταγωγής, εκ των οποίων 166 γυναίκες με ιστολογικά επιβεβαιωμένη ενδομητρίωση και 150 υγιείς μάρτυρες. Έγινε αρχικά λήψη ολικού περιφερικού αίματος και απομονώθηκε γονιδιωματικό DNA από τα λευκοκύτταρα με τη χρήση κατάλληλου εργοστασιακού Kit εξαγωγής DNA. Η γονοτύπηση των πολυμορφισμών rs7521902, rs10859871 και rs11031006 πραγματοποιήθηκε με τη χρήση των εξελιγμένων Taqman genotyping Kits, κάνοντας χρήση μιας πλατφόρμας PCR πραγματικού χρόνου.Τέλος, η γονοτύπηση των δυο πολυμορφισμών του γονιδίου της IL-16 βασίστηκε στο συνδυασμό της αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης με ανάλυση των RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphisms).ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑΑποκαλύφθηκε σημαντική συσχέτιση μόνο με τον γονότυπο AC του πολυμορφισμού rs7521902 του γονιδίου WNT4 σε γυναίκες με ενδομητρίωση σταδίου III και IV (P = 0.036, OR=1.96, 95% CI 1.05-3.65). Ενδείξεις γενετικής συσχέτισης με την ενδομητρίωση βρέθηκαν επίσης για τον γονότυπο AC του πολυμορφισμού rs10859871 του VEZT (P=0.01, OR=0.39, 95% CI 0.19-0.81). Επιπλέον, διαπιστώθηκε σημαντική διαφορά στην κατανομή του γονότυπου AG και του ελάσσονος αλληλόμορφου Α του πολυμορφισμού rs11031006 του γονιδίου FSHB μεταξύ των ασθενών με ενδομητρίωση και των μαρτύρων. Στις ασθενείς με ενδομητρίωση αναδείχθηκε μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση που αφορούσε τους γονότυπους GG και GT καθώς και το G αλληλόμορφο του πολυμορφισμού rs11556218 του γονιδίου IL-16. Ο πολυμορφισμός rs4072111 του γονιδίου IL-16 δεν βρέθηκε να συσχετίζεται με αυξημένη ευαισθησία στην ενδομητρίωση. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι στις Ελληνίδες ο πολυμορφισμός rs11556218 σχετίζεται με την ενδομητρίωση προφανώς λόγω της επακόλουθης, ανώμαλης έκφρασης της IL-16, όπως φαίνεται και από τη βιοπληροφορική ανάλυση που πραγματοποιήθηκε. Το γεγονός αυτό υποδεικνύει μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ της μετάλλαξης και της λειτουργικής τροποποίησης στην προ-ιντερλευκίνη 16 (Pro-IL-16).ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Ο γονότυπος AC του γενετικού πολυμορφισμού rs7521902 του γονιδίου WNT4 συσχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο εμφάνισης ενδομητρίωσης μόνο σε γυναίκες σταδίου III ή IV. Ο γενετικός πολυμορφισμός rs11556218 του γονιδίου IL-16 συσχετίζεται με αυξημένη προδιάθεση για την εμφάνιση ενδομητρίωσης σε γυναίκες από την Ελλάδα τόσο σε επίπεδο γονοτύπων όσων και αλληλομόρφων.