Μοριακές τεχνικές στη διάγνωση του χολαγγειοκαρκινώματος

Abstract

The preoperative diagnosis of cholangiocarcinoma often relies on the cytologic examination of smears obtained from Endoscopic Retrograde Cholangio-Pancreatography (ERCP) brushing. Though of high specificity, this method is hampered by a low sensitivity (about 25%). The study of the cytological material with Fluorescence In-Situ Hybridization (FISH) has significantly enhanced the potential of the cytologic examination by increasing the sensitivity to 40%. In our study on 41 patients with cholangiocarcinoma we attempt to standarize and apply a modification of FISH with detectors for the 7q31, 11q13(CCND1), 17p53(ρ53), και 9p21 (ΙΝΚ4 locus) together with the respective centromere probe.Overall, in all 38 hyperdiploid cases, the FISH tests showed overrepresentation of at least two chromosomes, either on imprints or on smears. Among the 32 positive cases from the tests on smears, 9p21 deletion was found in 5 and 17p13 deletion in 3 (with the two aberrations concurrent in 1 case). These cases were hyperdiploid and deletions were detected in hyperdiploid cells only. 11q13 (CCND1) amplification (with at least 10 copies) was documented in another two cases, both with Klatskin tumor. In one of them CCND1 amplification was the only abnormal FISH finding and in the other it was found together with hyperdiploidy, but in apparently different clones.In conclusion, modified FISH protocol is effective in detecting malignant cells in cytological preparations from ERCP brushing with a high degree of sensitivity (91.4%), thus further enhancing the diagnostic potential of the routine cytology approach.

Η προεγχειρητική διάγνωση του εξωηπατικού χολαγγειοκαρκινώματος γίνεται με την κυτταρολογική εξέταση, που λαμβάνεται κατά τη διάρκεια της ενδοσκοπικής παλίνδρομης χολαγγειο-παγρεατογραφίας (endoscopic retrograde cholagiography-ERCΡ) με βούρτσισμα των χοληφόρων. Η μέθοδος παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα αλλά χαμηλή ευαισθησία (περίπου 25%). Η μελέτη του ίδιου υλικού με την μέθοδο του Φθορίζοντος In-Situ Υβριδισμού (Fluorescent In Situ Hybridization-FISH) αυξάνει την ευαισθησία σε 40%. Στη μελέτη μας, σε 41 ασθενείς με χολαγγειοκαρκίνωμα, επιχειρείται προτυποποίηση και εφαρμογή παραλλαγής της FISH με ανιχνευτές για τις περιοχές 7q31, 11q13(CCND1), 17p53(ρ53), και 9p21 (ΙΝΚ4 locus), μαζί με το αντίστοιχο κεντρομεριδιακό ανιχνευτή. Η υπερδιπλοειδία με τη συμμετοχή τουλάχιστον 2 από τα 4 χρωμοσώματα βρέθηκε σε 38 ασθενείς. Το έλλειμμα της 9p21 βρέθηκε στους 5 ασθενείς και έλλειμμα της 17p13 στους 3 από τις περιπτώσεις της υπερδιπλοειδίας, ενώ σε 1 περίπτωση βρέθηκαν ταυτόχρονα και τα δυο ελλείμματα. Η ενίσχυση CCND1 βρέθηκε σε 1 περίπτωση ως μόνη ανωμαλία και στην άλλη μαζί με την υπερδιπλοειδία, αλλά σε αλλά σε δυο διαφορετικούς κλώνους. Συμπερασματικώς, το έλλειμμα της 9p21 βρέθηκε στους 5 ασθενείς και έλλειμμα της 17p13 στους 3 από τις περιπτώσεις της υπερδιπλοειδίας, ενώ σε 1 περίπτωση βρέθηκαν ταυτόχρονα και τα δυο ελλείμματα. Η ενίσχυση CCND1 βρέθηκε σε 1 περίπτωση ως μόνη ανωμαλία και στην άλλη μαζί με την υπερδιπλοειδία, αλλά σε αλλά σε δυο διαφορετικούς κλώνους. Συμπερασματικώς, το τροποποιημένο πρωτόκολλο FISH είναι αποτελεσματικό για την ανίχνευση κακοήθων κυττάρων σε κυτταρολογικά παρασκευάσματα από ERCP βούρτσισμα και έχει υψηλό βαθμό ευαισθησίας (91.4%), ενισχύοντας έτσι περαιτέρω τις διαγνωστικές δυνατότητες της κυτταρολογικής εξέτασης. Επιπλέον, παρέχει άμεσα πρόσθετα στοιχεία σχετικά με το κυτταρογενετικό προφίλ του χολαγγειοκαρκινώματος, ιδίως όσον αφορά τις δομικές χρωμοσωμικές ανωμαλίες και κλωνική ποικιλομορφία.