Συχνότητα αντιγόνων του μείζονος συστήματος ιστοσυμβατότητας σε ειδικούς πληθυσμούς του διαμερίσματος της Θεσσαλίας

Abstract

INTRODUCTION: The purpose of the present doctoral thesis is the study of the genetic regions HLA -A, -B, -C and DRBi in the semi-mixed but also in the three closed Thessalian populations (“Vlahi”, “Sarakatsani”, “Karagounides”) and the comparison between those of semi-mixed greek andeuropean population which have been studied in the same way and whose results have been published in the international bibliography. MATERIAL: 517 people constituted the material of the study 274 men - 243 women). Analytically: 1. Semi-mixed Thessalians: 170 people 2. “Vlahi”: 127 people 3. “Sarakatsani”: 111 people 4. “Karagounides”: 109 people The people in the semi-mixed Thessalian population study, were healthy, aged between 18-65 years old, not related to one another and born in Thessalia, of at least 2 generations. In the subgroups (“Vlahi”, “Sarakatsani”, “Karagounides”) they needed to be three generations’ cleanblooded.Their purity (cleanbloodness) was checked both ethnologically (“Vlahiki” language, profession, knowledge and occupation with the relative customs, participation in differing organisations e.t.c.) aiming at the confirmation of the classification of the people in the suitable (analogous) population. METHOD: The standardization of HLA-typing was performed by isolating the genomic DNA from the leukocytes of peripheral blood, via the use of molecular techniques. More precisely, via enhancing the DNA with PCR and the use of special oligonucleidic primers (PCR - sequence specific primers, PCR - SSP), with the help of Dynalindustrial merchandise (Dynal SSP typing kit) and olerup (olerup SSP kit). The logistical program (software) STATA 9,0 was used for the genetical and statistical analysis of the results, while during the analysis the parametrical tests ANOVA and Perason X2 were used for comparing the quantitative and qualitative characteristics. The data was analysed via Helix Tree software (logistica program). The frequency of HLA -A, B, C and DRB1 the balance degree according to the law of Hardy Weinberg , the degree of imbalance connection and the frequency of HLA - haplotype of the population were identified. RESULTS: The results of the study showed that: 1) “Vlahi”, “Sarakatsani” and “Karagounides” from genetically distinct populations. 2) Striking differences arise between “Vlahous” and the semi-mixed Thessalian population, especially as far as the genetic regions MHC-A and MHC-CW* are concerned, during the Hardy - Weinberg analysis. 3) The semi-mixed Thessalian population is separated genetically from these three populations, however, it has gone through great influence by them. 4) The genetic composition of all populations studied, presents slight variations compared to the genetic composition of the semi-mixed greek population.5) The semi-mixed Greek populations has a slight genetical difference from the European one.6) The similarities seen between populations at the odds of finding the expected haplotypes show great interest. More particularly, the most dominant expected haplotypes are: A*01 - B*08 - Cw*07 - DRB*^ “Vlahi" - “Sarakatsani” - A*02 - B*18 - CW*07 - DRB*-|11 “Semi-mixed Thessalian” - “Karagounides” CONCLUSIONS: “Vlahi”, are genetically the densest Thessalian population, while the semi-mixed Thessalian population, “Karagounides” and “Sarakatsani” have shown to have gone through severe genetic effects.

ΕΙΣΑΓΩΓΗ Σκοπός της παρούσης διδακτορικής διατριβής αποτελεί η μελέτη των γενετικών τόπων HLA-A, -Β, -C και DRBi στον επίμικτο και σε τρεις κλειστούς (Βλάχοι, Σαρακατσάνοι, Καραγκούνηδες) Θεσσαλικούς πληθυσμούς, και η σύγκριση μεταξύ αυτών του Επίμικτου Ελληνικού και Ευρωπαϊκού πληθυσμού, που έχουν μελετηθεί με τον ίδιο τρόπο και τα αποτελέσματα έχουν δημοσιευθεί στη διεθνή βιβλιογραφία. ΥΛΙΚΟ Το υλικό της μελέτης αποτέλεσαν 517 άτομα (274 άνδρες -243 γυναίκες). Αναλυτικά: 1. Επίμικτοι Θεσσαλοί: 170 άτομα 2. Βλάχοι: 127 άτομα 3. Σαρακατσάνοι: 11 άτομα 4. Καραγκούνηδες: 109 άτομα Τα άτομα της μελέτης ήταν υγιή, ηλικίας 18-65 ετών, στον επίμικτο Θεσσαλικό πληθυσμό, να μην είναι συγγενείς μεταξύ τους και να είναι γεννημένοι στη Θεσσαλία οι ίδιοι και οι γονείς τους. Στις υποομάδες (Βλάχοι, Σαρακατσάνοι, Καραγκούνηδες) να είναι τρεις γενεές καθαροί μεταξύ τους. Η καθαρότητά τους ελέγχθηκε και εθνολογικά (Βλάχικη γλώσσα, επάγγελμα, γνώση και ενασχόληση με τα σχετικά έθιμα, συμμετοχή σε συλλόγους κ.λπ.) με στόχο την επιβεβαίωση της κατάταξης των ατόμων στον ανάλογο πληθυσμό. ΜΕΘΟΔΟΣ Η τυποποίηση των HLA - αλληλομόρφων έγινε με απομόνωση του γονιδιωματικού DNA από λευκά αιμοσφαίρια περιφερικού αίματος, με τη χρήση μοριακών τεχνικών. Συγκεκριμένα με ενίσχυση του DNA με PCR και χρήση ειδικών ολιγονουκλεοτιδικών αφετηριών (PCR - Sequence Specific Primers, PCR - SSP) με την βοήθεια των εμπορικών σκευασμάτων της Dynal (Dynal SSP typing kit) και της Olerup (Olerup SSP Kit). Για τη γενετική και τη στατιστική ανάλυση των αποτελεσμάτων χρησιμοποιήθηκε το λογισμικό STATA 9,0, ενώ για την σύγκριση των ποσοτικών και ποιοτικών χαρακτηριστικών κατά την ανάλυση εφαρμόστηκαν τα παραμετρικά τεστ ANOVA και Pearson χ2. Η γενετική διερεύνηση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με το λογισμικό Helix Tree. Προσδιορίστηκαν η συχνότητα των HLA - A, Β, C, και DRBi, ο βαθμός ισορροπίας με το νόμο Hardy Weinberg, ο βαθμός ανισορροπίας σύνδεσης και η αναμενόμενη συχνότητα των HLA - απλοτύπων των πληθυσμών. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Τα αποτελέσματα της μελέτης έδειξαν ότι: 1) Οι Βλάχοι, οι Σαρακατσάνοι και οι Καραγκούνηδες αποτελούν γενετικά διακριτούς πληθυσμούς. 2) Σημαντικές διαφορές όμως προκύπτουν ανάμεσα στους Βλάχους και τον επίμικτο Θεσσαλικό πληθυσμό κυρίως όσον αφορά τους γενετικούς τόπους MHC-A και MHC-CW* κατά την ανάλυση Hardy-Weinberg. 3) Ο επίμικτος Θεσσαλικός πληθυσμός διακρίνεται γενετικά από τους τρεις αυτούς πληθυσμούς, έχει όμως υποστεί σημαντική επίδραση από αυτούς. 4) Η γενετική σύσταση όλων των πληθυσμών που μελετήθηκαν, παρουσιάζει μικρές σχετικά αποκλίσεις από τη γενετική σύσταση του Επίμικτου Ελληνικού Πληθυσμού. 5) Ο επίμικτος Ελληνικός πληθυσμός έχει μικρή γενετική απόσταση από τον Ευρωπαϊκό. 6) Ενδιαφέρον παρουσιάζουν οι ομοιότητες ανά δύο στις πιθανότητες ανεύρεσης των αναμενόμενων απλοτύπων. Συγκεκριμένα ο επικρατέστερος αναμενόμενος απλότυπος είναι: Α*01 - Β*08 - Cw*07 - DRB*i03 Βλάχοι - Σαρακατσάνοι και Α*02 -B*18 - CW*07 - DRB*^ 1 επίμικτοι Θεσσαλοί - Καραγκούνηδες. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ: Οι Βλάχοι είναι ο γενετικά περισσότερο συμπαγής Θεσσαλικός πληθυσμός, ενώ ο επίμικτος Θεσσαλικός πληθυσμός, οι Καραγκούνηδες και οι Σαρακατσάνοι, έχουν υποστεί σημαντικές γενετικές επιδράσεις.