Μελέτη λοιμώξεων από παθογόνους εντεροϊούς που προκαλούν μηνιγγίτιδες και εγκεφαλίτιδες με μοριακές τεχνικές

Abstract

Background: Enteroviruses are the most common cause of viral meningitis. They present a worldwide distribution, causing both outbreaks or sporadic cases. The aim of the present study was to detect and identify by molecular methods the circulating types of enteroviruses causing aseptic meningitis and encephalitis in Greece for the period of 2007 to 2009. Methods: RNA was extracted from 200μL of CSF RT-PCR targeting the 5-UTR of viral genome was used for detection of enteroviruses RT-nested PCR targeting the VP1 gene, followed by sequencing, was then performed in order to determine the enterovirus serotype. Results: In the present study 164 CSF specimens from equal patients with diagnosed or suspected aseptic ningitis, were tested in order to determine a possible enteroviral etiology from September 2007 to February 2009. Sixty eight (68) out of 164 specimens (41 5%) tested positive for the presence of enterovirus and 31 (46%) of these were successfully typed. Echo virus 30 was determined as the predominant serotype (39%), followed by Coxsackie B5 (26%) Coxsackie A9 (6%), Echovirus 9 (6%) Echovirus 13 (6%), Echo virus 6 (6%), Coxsackie virus B4 (6%), and Echovirus 11 (3%). Of the 68 patients with positive enterovirus result, 43 were male and 25 were female. The vast majority were children up to 15 years old (95.5%) and only 2 were adults (>15years). The majority of patients who were found to be enterovirus positive showed abnormal CSF profile, with higher than normal white cell blood count (>5/mm3) (94%) and/or elevated protein level (>45mg/dl) (52%) and all presented the typical clinical symptoms of aseptic meningitis, consisting of fever (88.5%), headache (38 5%) and neck stiffness (21.2%). Conclusions: Overall eight enterovirus serotypes were found to co-circulate, causing cases of aseptic meningitis, during the period of study, while an outbreak due to Echo virus 30 during November and December 2008 was recorded. As a result of this, Echovirus 30 was the predominant serotype, followed by Coxsackie B5. Regarding the epidemiological and clinical data of patients with aseptic meningitis due to enterovirus, our results are in general consistent with most of the previous studies reported.

Εισαγωγή: Οι εντεροϊοί αποτελούν το πιο κοινό αίτιο ιογενούς μηνιγγίτιδας. Εμφανίζουν παγκοσμία κατανομή, τόσο με επιδημικό όσο και ενδημικό πρότυπο. Στόχος: Η επιδημιολογική μελέτη των εντεροϊών που προκαλούν μηνιγγίτιδες και εγκεφαλίτιδες, με τη χρήση μοριακών τεχνικών. Μέθοδοι: Η απομόνωση του γενετικού υλικού από τα δείγματα έγινε από 200μL δείγματος με κατάλληλη εμπορική μέθοδο. Η ανίχνευση και η τυποποίηση των εντεροϊών έγινε με μεθόδους RT-PCR, που ενισχύουν τμήμα της 5-UTR και του VP1 γονίδιου του ιικού γονιδιώματος αντίστοιχα, και ακολούθησε αλληλούχιση του προϊόντος. Αποτελέσματα: Στην παρούσα μελέτη, από τον Σεπτέμβριο 2007 έως τον Φεβρουάριο 2009 εξετάστηκαν για την παρουσία εντεροϊών 164 δείγματα εγκεφαλονωτιαίου υγρού (ΕΝΥ) από ασθενείς με διάγνωση ή υποψία μηνιγγίτιδας. Από τα 164 δείγματα που εξετάστηκαν τα 68 (41,5%) βρέθηκαν θετικά για την παρουσία εντεροϊών και από αυτά στα 31 (46%) κατέστη δυνατή η τυποποίηση του υπευθύνου στελέχους. Επικρατέστερος ορότυπος προσδιορίσθηκε ο Echo virus 30 (39%) και ακολούθησαν ο Coxsackie Β5 (26%), οι Coxsackie Α9 (6%) Echovirus 9 (6%), Echovirus 13 (6%), Echovirus 6 (6%), Coxsackie B4 (6%) και Echovirus 11 (3%). Από τους 68 ασθενείς με θετικό για εντεροϊούς αποτέλεσμα, 43 ήταν άνδρες και 25 γυναίκες. Η μεγάλη πλειοψηφία ήταν παιδιά έως 15 ετών (95,5%) και μόνο 2 ήταν ενήλικες (>15 ετών). Η πλειοψηφία των ασθενών εμφάνιζαν μη φυσιολογικές τιμές ΕΝΥ, με πλειοκύττωση (>5κυτταρα/μ1) στο 94% των ασθενών ή/και μη φυσιολογικές τιμές λευκώματος (>45mg/dl) στο 52% των ασθενών. Όλοι οι ασθενείς εμφάνιζαν τα τυπικά συμπτώματα της άσηπτης μηνιγγίτιδας, με κυριώτερα εμπύρετο (88,5%), κεφαλαλγία (38,5%) και αυχενική δυσκαμψία (21,2%). Συμπεράσματα: Συνολικά, οκτώ ορότυποι βρέθηκαν να κυκλοφορούν παράλληλα κατά τη διάρκεια της μελέτης, ενώ μια επιδημία Echo virus 30 κατά το Νοέμβριο και Δεκέμβριο 2008 καταγράφηκε. Το γεγονός αυτό οδήγησε στην ανάδειξη του Echo virus 30 (Ε30) ως επικρατέστερου οροτύπου, ακολουθουμένου από τον Coxsackie Β5 (CB5). Όσον αφορά στα επιδημιολογικά και κλινικά δεδομένα των ασθενών τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης είναι σε γενικές γραμμές συμβατά με τις περισσότερες μελέτες που έχουν δημοσιευτεί.