Μελέτη λοιμώξεων του αναπνευστικού συστήματος από παθογόνους ιούς με χρήση μοριακών τεχνικών

Abstract

Acute respiratory tract infections caused by viruses are the most common illnesses in humans and are associated with significant morbidity and mortality. However, diagnosis of respiratory virus infections is complicated by the large number of viruses and the overlapping clinical presentations of these infections. Although nucleic acid amplification techniques offer increased sensitivity and improved standardization relative to viral culture and antigen detection methods, their application to respiratory virus detection has been limited by the need to set up individual assays to detect each virus infection and their limited multiplexing capacity. In this study, DNA microarray technology (CLART Pneumovir -Genomica SA, Madrid) was used in order to detect 17 respiratory viruses on 60 nasopharyngeal aspirates, which had been collected in Athens during February, March, April and May 2009. CLART Pneumovir revealed the presence of respiratory viruses in 23 samples. Influenza viruses (types H1N1, H2N3 and B), RSV (types A and B), hMPVA, HRV, Adenovirus, HCoV 229E and HBoV were detected. Influenza virus was the most frequently encounterd viral pathogen (65%), followed by RSV (13%). It was the first time that HBoV was detected in Greek adult. Headache seemed to be strongly associated with respiratory virus infections, whereas low fever and antronasal pain were associated with Influenza virus infections. Former use of macrolides was also associated with respiratory virus infection. No other correlations between respiratory virus infections and clinical or demographic data were found. These findings suggest that DNA microarray technology is a useful tool for respiratory virus detection and can help in these epidemiological studies.

Οι οξείες ιογενείς λοιμώξεις του αναπνευστικού συστήματος είναι οι συχνότερες ασθένειες του ανθρώπου και συνδέονται με σημαντική νοσηρότητα και θνητότητα. Η διάγνωσή τους, όμως, περιπλέκεται από το μεγάλο αριθμό των ιών και την αλληλοεπικαλυπτώμενη κλινική εικόνα των λοιμώξεων αυτών. Παρόλο που οι τεχνικές πολλαπλασιασμού των νουκλεϊκών οξέων αύξησαν την ευαισθησία και βελτίωσαν την επαναληψιμότητα σε σχέση με τις ιικές καλλιέργειες και της μεθόδους ανίχνευσης ιικών αντιγόνων, η εφαρμογή τους στη διάγνωση των αναπνευστικών ιών υπόκειται στους περιορισμούς της ανάγκης ξεχωριστής ανίχνευσης του κάθε ιού και της περιορισμένης πολυπλεκτικής ικανότητας της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πραγματικού χρόνου. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήθηκε η τεχνολογία των DNA μικροσυστοιχιών (CLART Pneumovir -Genomica SA, Madrid), προκειμένου να ανιχνευθούν 17 αναπνευστικοί ιοί σε 60 ρινοφαρυγγικές εκκρίσεις, οι οποίες συλλέχθηκαν στην Αθήνα, το διάστημα Φεβρουάριος- Μάιος 2009. Το CLART Pneumovir αποκάλυψε την παρουσία κάποιου αναπνευστικού ιού σε 23 δείγματα. Ανιχνεύθηκαν ιοί της γρίπης (τύποι Η1Ν1, Η2Ν3 και Β), αναπνευστικός συγκυτιακός ιοί (τύποι Α και Β), ανθρώπινος μεταπνευμοϊός τύπου Α, ανθρώπινος ρινοϊός, αδενοϊός, ανθρώπινος κορωναϊός 229Ε και ανθρώπινος ιός Boca. Ο ιός της γρίπης ήταν ο ιός που ανιχνεύθηκε σε μεγαλύτερη συχνότητα (65%), ακολουθούμενος από τον αναπνευστικό συγκυτιακό ιό (13%). Ήταν η πρώτη φορά που ανιχνεύθηκε ο ανθρώπινος ιός Boca σε ενήλικα στην Ελλάδα. Η κεφαλαλγία φαίνεται να συνδέεται με την ύπαρξη ιογενούς αναπνευστικής λοίμωξης, ενώ ο χαμηλός πυρετός και το άλγος των ιγμορείων με τη λοίμωξη από ιό της γρίπης. Πρόσφατη λήψη μακρολίδων φαίνεται επίσης να συσχετίζεται με λοίμωξη από αναπνευστικό ιό. Άλλες συσχετίσεις μεταξύ των ιογενών λοιμώξεων του αναπνευστικού και κλινικών ή δημογραφικών δεδομένων δεν βρέθηκαν. Από τα ευρήματα αυτά προκύπτει ότι η τεχνολογία των DNA μικροσυστοιχιών είναι ένα χρήσιμο εργαλείο στην ανίχνευση των αναπνευστικών ιών και μπορεί να βοηθήσει σε τέτοιου είδους επιδημιολογικές μελέτες.