Μοριακή μελέτη ογκογονιδίων και ογκοκατασταλτικών γονιδίων σε νεοπλασματικές επεξεργασίες του μεταβατικού επιθηλίου της ουροδόχου κύστεως

Abstract

The purpose of this thesis is the molecular and lmmunohistochemical study of urinary bladdercancer and the correlation of the findings with the clinicopathoanatomic features Thus it willbe possible to find more valid methods for diagnosis prognosis and monitoring of the diseaseTotal DNA was isolated and certain sequences were amplified by PCR, screened formutations by SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) NIRCA (Non IsotopieRNA Cleavage Assay) and vertical Polyacrylamide gel electrophoresis The results wereconfirmed using the method of sequencing Besides lmmunohistochemical methods wereused to study protein expressionThe NIRCA assay (Ambion) is a sensitive technique for p53 gene mutation detection inbladder cancer The presence of p53 mutations did not seem to offer additional prognosticinformation Contrary to the lack of significant correlation between the Fas protein expressionand the grade the stage and the papillary status of the tumour FasL and c-FLIP levelsincreased with advanced (T3 T4) stages An important finding is that c-FLIP protein can beused as independent marker for the prognosis in urinary bladder cancer Finally the presenceof microsatelhte instability neither correlates to classic pathologoanatomic parameters inurinary bladder cancer nor does it appear to be of prognostic significance though plays rolein urothelial carcinogenesis The absence of a relation between microsatelhte instability andp53 mutations suggests that mismatch repair deficiency operates independently of p53 for the development of urothelial carcinomas.

Σκοπός της εργασίας είναι η μοριακή και ανοσοιστοχημικη μελέτη των ουροθηλιακωνκαρκινωμάτων της ουροδόχου κυστεως και ο συσχετισμός των ευρημάτων με τακλινικοπαθολογοανατομικα χαρακτηριστικά ώστε να καταστεί δυνατή η εύρεση μεθόδωνδιάγνωσης πρόγνωσης και παρακολούθησης της ασθένειαςΈγινε απομόνωση ολικού DNA πολλαπλασιασμός επιλεγμένων αλληλουχιών με τηναλυσιδωτή αντίδραση πολυμερασης ανίχνευση μεταλλαγών με τις μεθόδους SSCP(πολυμορφισμοί διαμόρφωσης μονοκλωνης αλυσίδας) NIRCA (μη ισοτοπική πέψη τουRNA) και κάθετη ηλεκτροφορηση σε πολυακρυλαμιδη και επιβεβαίωση των μεταλλαγών μεανάλυση πρωτοδιαταξης των νουκλεοτιδιων Επίσης έγινε μελέτη της έκφρασης πρωτεϊνώνμε ανοσοιστοχημειαΜε βάση τα αποτελέσματα των πειραμάτων προέκυψαν τα συμπεράσματα Η NIRCA είναιμια ευαίσθητη μέθοδος για την ανίχνευση των μεταλλαγών του γονίδιου ρ53 Οι μεταλλαγέςτου ρ53 δεν προσφέρουν επιπλέον προγνωστική πληροφορία Η έκφραση των FasL και eFLIP αυξάνεται με την αύξηση της κακοήθειας Η πρωτεΐνη c FLIP μπορεί ναχρησιμοποιηθεί σαν ανεξάρτητος δείκτης για την πρόγνωση στον καρκίνο της ουροδόχουκυστεως Η μικροδορυφορικη αστάθεια δεν εμφανίζει προγνωστική άξια στα ουροθηλιακακαρκινώματα παρόλο που παίζει ρολό στην καρκινογένεση του ουροθηλιου Η απουσίασχέσης μεταξύ της μικροδορυφορικης αστάθειας και των μεταλλαγών του ρ53 υπονοεί πως η απώλεια της επιδιόρθωσης παράταιρα ζευγαρωμένων βάσεων λειτουργεί ανεξάρτητα απο τορ53 στη εξέλιξη των ουροθηλιακων καρκινωμάτων.