Μοριακή ανάλυση δύο μεταγραφικών παραγόντων (hCSDA, DbpB) και συσχετισμός τους με τη μεταγραφική ενεργότητα των υποκινητών των γονιδίων της α-σ...

Abstract

ΠΡΟΚΕΙΜΕΝΟΥ ΝΑ ΑΠΟΜΟΝΩΘΟΥΝ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΑ ΜΟΡΙΑ ΠΟΥ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΟΥΝ ΜΕ ΤΗΝ ΠΕΡΙΟΧΗ ΑΠΟ -492 ΩΣ -477 (ΘΕΣΗ G7) ΤΟΥ ΥΠΟΚΙΝΗΤΗ ΤΗΣ Α-ΣΦΑΙΡΙΝΗΣ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΕΝΔΕΧΟΜΕΝΩΣ ΠΑΙΖΟΥΝ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΡΟΛΟ, ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΜΟΡΙΩΝ CDNA ΑΠΟ ΕΡΥΘΡΟΛΕΥΧΑΙΜΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ Κ562, ΚΑΙ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΕΝΑ ΜΟΡΙΟ CDNA ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΕΙ ΓΙΑ ΜΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΠΟΥ ΟΝΟΜΑΣΑΜΕ "HUMAN COLD SHOCK DOMAIN PROTEIN A" (HCSDA) Η ΟΠΟΙΑ ΤΑΥΤΙΖΕΤΑΙ ΜΕ ΤΗΝ DBPAV, ΚΑΙ ΕΝΑ ΜΟΡΙΟ CDNA, ΤΑΥΤΟΣΗΜΟ ΜΕ ΤΟ CDNA ΠΟΥ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΕΙ ΓΙΑ ΤΗΝ "DNA BINDING PROTEIN B"(DBPB). ΟΙ HCSDA ΚΑΙ DBPB ΑΝΗΚΟΥΝ ΣΕ ΜΙΑ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΩΝ ΠΟΥ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΥΠΑΡΞΗ ΜΙΑΣ ΣΥΝΤΗΡΗΜΕΝΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΗΣ ΠΕΡΙΟΧΗΣ, ΤΗΣ "COLD SHOCK DOMAIN",Η ΟΠΟΙΑ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΔΥΝΑΤΟΤΗΤΑ ΠΡΟΣΔΕΣΗΣ ΣΕ ΜΟΝΟΚΛΩΝΑ ΚΑΙ ΔΙΚΛΩΝΑ ΝΟΥΚΛΕΙΚΑ ΟΞΕΑ (DNA ΚΑΙ RNA). ΜΕΛΗ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ ΕΧΟΥΝ ΑΠΟΜΟΝΩΘΕΙ ΑΠΟ ΔΙΑΦΟΡΟΥΣ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟΥΣ, ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ, ΦΥΤΩΝ ΚΑΙ ΖΩΩΝ. ΤΜΗΜΑΤΑ CDNA ΤΗΣ HCSDA ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΓΙΑ ΤΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΟ ΕΝΤΟΠΙΣΜΟ ΤΩΝ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΜΕ ΑΝΑΛΥΣΗ SOUTHERN ΣΕ DNA ΑΠΟ ΜΟΝΟΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΙΚΑ ΥΒΡΙΔΙΑ ΑΝΘΡΩΠΟΥ-ΤΡΩΚΤΙΚΟΥ. ΤΑ ΔΥΟ ΓΟΝΙΔΙΑ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΘΗΚΑΝ ΣΤΑ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΑ 12 ΚΑΙ 16. ΕΠΙΣΗΣ, ΓΕΝΩΜΙΚΟΙ ΚΛΩΝΟΙ ΑΠΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΕΣ ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΕΣ YAC ΚΑΙ PAC ΠΟΥ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟΥΝ ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ ΠΟΥ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΕΙΤΑΙ ΣΤΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ 16, ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΑΝ ΚΑΙ ΑΞΙΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΓΙΑ ΤΗΝ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΤΟΝ ΑΚΡΙΒΕΣΤΕΡΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΟ ΕΝΤΟΠΙΣΜΟ ΤΟΥ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ ΜΕ ΑΝΑΛΥΣΗ FISH. ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ ΑΥΤΟ ΕΝΤΟΠΙΣΤΗΚΕ ΣΤΗ ΧΡΩΜΟΣΩΜΙΚΗ ΘΕΣΗ 16P11.2. Η ΣΧΕΤΙΚΗ ΜΕΤΑΓΡΑΦΙΚΗ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ HCSDA ΚΑΙ ΤΗΣ DBPB ΔΙΑΦΕΡΕΙ ΣΕ ΜΙΑ ΣΕΙΡΑΙΣΤΩΝ ΚΑΙ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

SCREENING OF AN EXPRESSION LIBRARY FOR REGULATORY FACTORS INTERACTING WITH THE-492 TO -477 REGION OF THE HUMAN A-GLOBIN PROMOTER (SITE G7), REVEALED A CDNADESIGNATED AS HUMAN COLD SHOCK DOMAIN PROTEIN A (HCSDA) AND A CDNA IDENTICAL TO A PREVIOUSLY DESCRIBED AS DNA BINDING PROTEIN B (DBPB). HCSDA IS HIGHLY HOMOLOGOUS TO THE PREVIOUSLY REPORTED DNA BINDING PROTEIN A (SAKURA ET AL., 1988) AND IDENTICAL TO DBPAV. THESE PROTEINS BELONG TO AN ANCIENT FAMILY CHARACTERIZED BY A HIGHLY CONSERVED STRUCTURAL MOTIF, THE "COLD SHOCK DOMAIN", WHICH HAS AFFINITY FOR A VARIETY OF DNA SEQUENCE MOTIFS AS WELL AS RNA. MEMBERS OF THIS FAMILY HAVE BEEN IDENTIFIED IN A NUMBER OF ORGANISMS INCLUDING BACTERIA, PLANTS AND ANIMALS. PHYLOGENETIC ANALYSIS SHOWS THAT THE "COLD SHOCK DOMAIN" PROTEIN FAMILY IS HIGHLY CONSERVED THROUGHOUT EVOLUTION, AND CONTAINS MEMBERS WHICH CAN BE SUBDIVIDED IN DISTINCT SUBFAMILIES. HCSDA CDNA FRAGMENTS WERE USED FOR CHROMOSOMAL LOCALIZATION OF THE HCSDA GENES BY SOUTHERN ANALYSIS OF MONOCHROMOSOMAL HUMAN/RODENT CELL HYBRID DNA PANEL. ISOLATED GENOMIC CLONES(YAC AND PAC) CORRESPONDING TO HCSDA SEQUENCES WERE USED FOR FISH ANALYSIS REVEALING AN INTRON-LESS PSEUDOGENE MAPPED TO CHROMOSOME 16P11.2. EXAMINATION OF THE SPECIFIC DISTRIBUTION OF HCSDA AND DBPB MRNAS IN HUMAN AND MOUSE TISSUESAND CELL LINES AND IN MOUSE EMBRYOS, CARRIED OUT BY NORTHERN ANALYSIS, REVEALED THAT HCSDA AND DBPB GENES SHOW DIFFERENTIAL LEVELS OF EXPRESSION IN DIFFERENT TISSUES AND CELL LINES AND THEIR LEVELS OF EXPRESSION DECLINE IN LATE STAGES OF (ABSTRACT TRUNCATED)