ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ ΣΤΗΝ ΟΡΝΙΘΑ

Abstract

IN ORDER TO STUDY THE COMPLEMENT SYSTEM OF ARES, ORGANISMS WHICH REPRESENT A SIGNIFICANT STAGE OF COMPLEMENT EVOLUTION, WE ISOLATED AND CLONED THE THIRD COMPONENT OF COMPLEMENTS (C3). USING THE REVERSE - TRANSCRIPTASE POLYMERASE CHAIN REACTION, WITH DEGENERATE OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS DERIVED FROM TWO CONSERVED C3 SEQUENCES AND LIVER MRNA AS TEMPLATE,WE ISOLATED THREE DISTINCT ~220 BPPCR PRODUCTS, ONE WITH HIGH DEGREE OF SEQUENCE SIMILARITY TO C3 AND TWO TO Α2M. THE COMPLETE CDNA SEQUENCE OF CHICKEN C3 WAS OBTAINED BY SCREENING CHICKEN LIVER CDNA LIBRARY WITH THE C3 PCR PRODUCT. THE DEDUCED AMINO ACID SEQUENCE SHOWS A 54, 54, 54, 53, 52, 57, 55% AMINO ACID IDENTITY TO HUMAN, MOUSE, RAT GUINEA PIG RABBIT COMBRA AND XENOPUS C3. THESE DATA ALLOWED US TO CONSTRUCT A PHYLOGENET TREE FOR C3, C4, C5 AND Α2M RELATED PROTEINS. CHICKEN C3 WAS PURIFIED FROM CHICKEN PLASMA IN A TWO STEP CHROMATOGRAPHIC PROCEDURE. IN ELISA EXPERIMENTS WE SHOWED THAT CHICKEN C3 BINDS HUMAN "FACTOR".

ΓΙΑ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΤΟΥ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ ΣΤΑ ΠΤΗΝΑ, ΑΠΟΜΟΝΩΣΑΜΕ ΚΑΙ ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΑΜΕ ΤΟ ΜΟΡΙΟ C3 ΤΗΣ ΟΡΝΙΘΑΣ. ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΤΗ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ RT - PCR ΜΕ ΕΚΦΥΛΙΣΜΕΝΑ ΟΛΙΓΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ ΠΟΥ ΣΧΕΔΙΑΣΤΗΚΑΝ ΑΠΟ ΔΥΟ ΣΥΝΤΗΡΗΜΕΝΕΣ ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΤΟΥ ΜΟΡΙΟΥ C3 ΚΑΙ ΩΣ ΜΗΤΡΑ, MRNA ΑΠΟ ΗΠΑΡ ΟΡΝΙΘΑΣ, ΑΠΟΜΟΝΩΣΑΜΕ ΤΡΕΙΣ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΥΣ ΚΛΩΝΟΥΣ. ΕΝΑ ΚΛΩΝΟ ΜΕ ΜΕΓΑΛΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΤΟ C3 ΑΝΘΡΩΠΟΥ ΚΑΙ ΔΥΟ ΑΛΛΟΥΣ ΚΛΩΝΟΥΣ ΜΕ ΜΕΓΑΛΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΜΕΛΗ ΤΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ ΤΩΝ Α - ΜΑΚΡΟΣΦΑΙΡΙΝΩΝ. Η ΠΛΗΡΗΣ CDNA ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑ ΤΟΥ C3 ΟΡΝΙΘΑΣ ΒΡΕΘΗΚΕ ΚΑΝΟΝΤΑΣ ΔΙΑΛΟΓΗ ΣΕ ΜΙΑ CDNA ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ ΑΠΟ ΗΠΑΡ ΟΡΝΙΘΑΣ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΩΣ ΑΝΙΧΝΕΥΤΗ ΤΟΝ ΚΛΩΝΟ C3 ΟΡΝΙΘΑΣΠΟΥ ΠΡΟΕΚΥΨΕ ΑΠΟ ΤΗΝ RT - PCR. Η ΠΛΗΡΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑ ΤΟΥ ΜΟΡΙΟΥ C3 ΟΡΝΙΘΑΣ ΕΔΕΙΞΕ (ΣΕ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΟ ΕΠΙΠΕΔΟ) ΜΙΑ ΟΜΟΙΟΤΗΤΑ ΤΗΣ ΤΑΞΗΣ ΤΟΥ 54, 54, 54, 53, 52, 57 ΚΑΙ 55% ΣΥΓΚΡΙΝΟΜΕΝΗ ΜΕ ΤΟ ΜΟΡΙΟ C3 ΑΝΘΡΩΠΟΥ, ΜΥ, ΕΠΙΜΥ, ΙΝΔΙΚΟΥ ΧΟΙΡΙΔΙΟΥ,ΚΟΜΠΡΑΣ ΚΑΙ ΧΕΝΙΦΡΗΣ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΒΑΣΕΙ ΑΥΤΩΝ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΑΜΕΕΝΑ ΦΥΛΟΓΕΝΕΤΙΚΟ ΔΕΝΤΡΟ ΠΟΥ ΔΕΙΧΝΕΙ ΤΗ ΣΧΕΣΗ ΤΩΝ ΠΡΟΤΕΙΝΩΝ C3, C4, C5 ΚΑΙ Α - ΜΑΚΡΟΣΦΑΙΡΙΝΩΝ. ΕΠΙΣΗΣ ΤΟ ΜΟΡΙΟ C3 ΟΡΝΙΘΑΣ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΑΠΟ ΠΛΑΣΜΑ ΟΡΝΙΘΑΣ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΔΥΟ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΑ ΒΗΜΑΤΑ ΚΑΙ ΣΕ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ELISA ΕΛΕΓΞΑΜΕ ΤΗΝ ΑΛΛΗΛΕΠΙΔΡΑΣΗ ΜΕ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ.