Ο ρόλος των αντί-γδ TCR στην ενεργοποίηση των T-ρυθμιστικών κυττάρων και της Th17 οδού σε πειραματική ισχαιμία/επαναιμάτωση του ήπατος

Abstract

Neutrophil and T-cell recruitment contribute to hepatic ischemia-reperfusion injury. The initial inflammatory response is orchestrated by Kupffer cells and liver sinusoid endothelial cells. However, other cell types, including γδ T-cells, seem to be key mediators in further inflammatory cell recruitment and proinflammatory cytokine release. In this study, we used an in vivo model of partial hepatic ischemia-reperfusion injury (IRI) to investigate the role of the γδ T-cell receptor (γδ TCR) in the pathogenesis of liver injury. Thirty C57BL6 mice were subjected to 60 min of ischemia followed by 6 h of reperfusion (RN 6339/2/2016). The experimental group received an intraperitoneal injection of anti-γδTCR antibodies 72hours before subjected to the partial hepatic ischemia reperfusion. Pretreatment with anti-γδ TCR antibodies resulted in a reduction in histological and biochemical markers of liver injury, as well as reduction in neutrophil and T-cell infiltration. Inflammatory cytokine production was reduced and downregulation of NF-κB was also observed. Overall, neutralizing γδ TCR seems to have a protective role in liver IRI, mainly by reducing neutrophil and T-cell recruitment, but also by changing the proinflammatory cytokine levels. This places γδTCR as a possible pharmacological target for the development of treatments to minimise the impact of hepatic ischemia-reperfusion injury in the clinical setting.

Τα ουδετερόφιλα και τα Τ-λεμφοκύτταρα μεταναστεύουν στο ήπαρ στα αρχικά στάδια της επαναιμάτωσης και συνεισφέρουν στην ηπατική βλάβη από ισχαιμία-επαναιμάτωση. Η αρχική ανοσολογική απάντηση ενορχηστρώνεται από τα κύτταρα Kupffer και τα ενδοθηλιακά κύτταρα των κολποειδών του ήπατος. Ωστόσο, σε αυτήν την απάντηση συμμετέχουν και άλλοι κυτταρικοί τύποι, μεταξύ των οποίων τα γδ Τ-λεμφοκύτταρα, τα οποία φαίνεται να είναι διαμεσολαβητές κλειδί όσον αφορά την στρατολόγηση των ουδετεροφίλων και την παραγωγή προφλεγμονωδών κυτταροκινών. Στη μελέτη που πραγματοποιήσαμε, χρησιμοποιήσαμε ένα invivo μοντέλο μερικής ηπατικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης (I-E) με σκοπό να μελετήσουμε τον ρόλο του υποδοχέα γδ T-cellreceptor (γδ TCR) στην παθογένεση της ηπατικής βλάβης. Τριάντα μύες τύπου C57BL6 υποβλήθηκαν σε 60 min ισχαιμίας ακολουθούμενα από 6h επαναιμάτωσης. Η πειραματική ομάδα έλαβε με ενδοπεριτοναϊκή έγχυση αντισώματα έναντι του γδ ΤCR (αντι-γδ TCR) 72 ώρες προτού υποβληθούν στο πρωτόκολλο της μερικής ηπατικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. Η μελέτη εγκρίθηκε από την σχετική επιτροπή βιοηθικής με αριθμό πρωτοκόλλου RN 6339/2/2016.Η χορήγηση των αντι-γδ TCR αντισωμάτων οδήγησε σε μείωση των ιστολογικών και βιοχημικών παραμέτρων ηπατικής βλάβης, αλλά και σε μείωση της διήθησης του ηπατικού παρεγχύματος από λεμφοκύτταρα και λοιπά Τ-λεμφοκύτταρα. Η παραγωγή προφλεγμονωδών κυτταροκινών μειώθηκε και παρατηρήθηκε μειωμένη ενεργοποίηση μεταγραφικών παραγόντων, όπως ο NF-κB, που διαδραματίζει κεντρικό ρόλο στη φλεγμονώδη απάντηση μετά την Ι-Ε. Η αδρανοποίηση του υποδοχέα γδ TCR φαίνεται να παίζει προστατευτικό ρόλο στην ηπατική βλάβη από Ι-Ε κυρίως μειώνοντας την στρατολόγηση των ουδετεροφίλων και των Τ-λεμφοκυττάρων στο ήπαρ, αλλά και μειώνοντας τα επίπεδα διαφόρων προφλεγμονωδών κυτταροκινών. Το γεγονός αυτό αναδεικνύει τον γδ TCR ως φαρμακολογικό στόχο για μελλοντικές θεραπείες, που θα προσπαθήσουν να μειώσουν την ηπατική βλάβη σε πραγματικές συνθήκες.