Ο ρόλος της κυτταρολογικής εξέτασης με τη μέθοδο της κυτταρολογίας υγρής φάσης υλικού παρακεντήσεων με λεπτή βελόνη του θυρεοειδούς αδένα σε πληθυσμό γενικού νοσοκομείου

Abstract

Background: Thyroid fine needle aspiration, is considered of paramount importance for the appropriate management of nodular thyroid lesions. The cytologic evaluation is supported at cases in subjective criteria since standardized processes have not been imported in the daily diagnostics practice, in samples prepared with the conventional technique of smearing.Objective: The role of liquid based cytology, as an exclusive cytopreparatory method in thyroid fine needle aspiration samples, was investigated. The objectification of the diagnostic process, providing a reliable preoperative diagnostic proposal for an appropriate management of nodular thyroid lesions, was the aim of this investigation.Materials and Methods: Five hundred patients, aged 13 to 85 years (mean: 48.95 years) with nodules measured from 0.5 to 5 cm (average : 1.66 cm) were studied. All cases were selected on the basis of histopathologic diagnosis existing from a total of 4208 patients, submitted in thyroid fine needle aspiration under ultrasound-guidance from 2005 to 2011. All aspirates were prepared according to the ThinPrep® technique. The smears were Papanicolaou stained. The diagnostic features were evaluated by two experienced cytopathologists and the reports were issued according to the Bethesda classification for reporting thyroid cytopathology (TBSRTC). The microscopic findings related to the smear cellularity, the cytoplasmic and nuclear characters, as well as the architecture of the cell groups and the background, were recorded in an electronic database. Patients were subdivided into three categories depending on the histological diagnosis. The reproducibility of diagnostic criteria , was statistically analyzed. The possibility of performing ancillary techniques , was also estimated. In selected cases the residual material, was used in preparing more slides, in order to evaluate the expression of 4 monoclonal antibodies. Moreover, 160 cases were submitted in molecular investigation for detecting the BRAF V600E proto-oncogene.Results: The overall diagnostic accuracy was 95,05%, with 89,81% and 98,92% sensitivity and specificity, respectively . The Kappa Statistics test correlating the reports between two observers showed that, there is an almost perfect agreement (p<0.001 ). Correlating the cytological reporting of two observers with the histological diagnosis, the ROC curves showed that outstanding accuracy of the observers concerning histological diagnosis does not differ statistically significantly (p>0.01). Ιmmunoreactivity was observed >80% in cases of papillary carcinoma for Ck 19, HBME-1, and Galectin-3. Immunostain for calcitonin was positive 100% in cases of medullary carcinoma. The BRAF mutation was detected in 54,83% and 77.33% of patients with borderline and malignant cytological diagnosis respectively, concerning papillary carcinoma.Conclusions: According to our study, LBC method by the presence of stable cell morphology in smears, provides reproducibility of the morphological criteria, promotes objectification of the diagnostic process, showing also a high overall accuracy. Moreover, the possibility of performing ancillary techniques in the samples, enhances the diagnostic role of thyroid FNA, contributing decisively in the appropriate management of nodular thyroid lesions in a General Hospital.Key Words: thyroid, thyroid carcinoma, fine-needle aspiration, cytopathology, histopathology, reporting system, reproducibility, liquid based cytology.

Εισαγωγή : Η παρακέντηση με λεπτή βελόνα του θυρεοειδούς, θεωρείται υψίστης σημασίας για την επιλογή των ασθενών που χρήζουν θυρεοειδεκτομής. Η κυτταρολογική αξιολόγηση στηρίζεται κατά περιπτώσεις σε υποκειμενικά κριτήρια, δεδομένου ότι μετρητικές διαδικασίες δεν έχουν εισαχθεί στην καθημερινή διαγνωστική πρακτική, στα επιχρίσματα που παρασκευάζονται με τη συμβατική τεχνική επίστρωσης.Σκοπός : Στην παρούσα μελέτη διερευνήθηκαν οι δυνατότητες της μεθόδου κυτταρολογίας υγρής φάσης σε υλικό παρακέντησης με λεπτή βελόνη (FNA) όζων του θυρεοειδούς αδένα. Η αντικειμενοποίηση της διαγνωστικής διαδικασίας και η παροχή αξιόπιστης προεγχειρητικής διαγνωστικής πρότασης για τον σχεδιασμό της κατάλληλης αντιμετώπισης των ασθενών, αποτέλεσε τον σκοπό της μελέτης μας.Υλικό και μέθοδοι: Μελετήθηκαν 500 ασθενείς 13 έως 85 ετών (μέση τιμή: 48,95 έτη) με διάμετρο όζων από 0,5 εκ έως 5 εκ (μέση τιμή 1,66 εκ). Οι περιπτώσεις επιλέχθηκαν με κριτήριο την ύπαρξη ιστολογικής επιβεβαίωσης από ένα σύνολο 4208 ασθενών που υποβλήθηκαν σε FNA υπό υπερηχογραφική καθοδήγηση (US-FNA) από το 2005 μέχρι το 2011. Τα επιχρίσματα παρασκευάστηκαν σύμφωνα με την τεχνική ThinPrep® και εχρώσθησαν κατά Παπανικολάου. Οι μορφολογικοί χαρακτήρες αξιολογήθηκαν από δύο τουλάχιστον έμπειρους παρατηρητές, εφαρμόζοντας τη διαγνωστική ταξινόμηση του συστήματος κατά Bethesda (TBSRTC). Τα μικροσκοπικά ευρήματα που αφορούσαν την κυτταρικότητα, τους πυρηνικούς και κυτταροπλασματικούς χαρακτήρες, την αρχιτεκτονική των κυτταρικών αθροίσεων και το υπόστρωμα καταγράφηκαν σε ηλεκτρονική βάση δεδομένων. Οι ασθενείς υποδιαιρέθηκαν σε τρείς κατηγορίες ανάλογα με την ιστολογική διάγνωση. Εγινε συσχέτιση κυτταρολογικής-ιστολογικής διάγνωσης. Η αναπαραγωγιμότητα των διαγνωστικών κριτηρίων αναλύθηκε στατιστικά. Επιπλέον, σε επιλεγμένες περιπτώσεις, υπολογίστηκε η δυνατότητα εφαρμογής επικουρικών μεθόδων στο υλικό που παρέμενε στο φιαλίδιο, εκτιμώντας ανοσοκυτταροχημικά την έκφραση τεσσάρων μονοκλωνικών αντισωμάτων και διερευνώντας μοριακά το ογκογονίδιο BRAF.Αποτελέσματα: Η διαγνωστική ακρίβεια της μεθόδου ήταν 95,05%, με ευαισθησία και ειδικότητα 89,81% 98,92%., αντίστοιχα. Η δοκιμασία με Kappa Statistics για τη συσχέτιση των αποτελεσμάτων μεταξύ των δύο παρατηρητών έδειξε ότι υπάρχει εξαιρετική συμφωνία (p<0.001 ). Οι καμπύλες ROC για τη συσχέτιση των αποτελεσμάτων των δύο παρατηρητών με την ιστολογική διάγνωση, έδειξαν ότι, η διαγνωστική ακρίβεια των δύο παρατηρητών όσον αφορά και στην ιστολογική διάγνωση δεν διαφέρει στατιστικά σημαντικά (p>0.01). Παρατηρήθηκε ανοσοθετικότητα >80% για το θηλώδες καρκίνωμα σε Ck 19, HBME-1, και Galectin-3 και 100% για το μυελοειδές καρκίνωμα στο αντίσωμα calcitonin. Σε 160 επιλεγμένες περιπτώσεις, ανιχνεύτηκε η μεταλλαγή του ογκογονιδίου BRAF V600E, κατά 54,83% και 77,33% σε ασθενείς με αμφίβολη και κακοήθη κυτταρολογική διάγνωση, αντίστοιχα, αφορώντας το θηλώδες καρκίνωμα.Συμπεράσματα: Η παρουσία σταθερών κυτταρικών χαρακτηριστικών στα επιχρίσματα υγρής φάσης, προσφέρει σημαντική δυνατότητα αναπαραγωγιμότητας των μορφολογικών κριτηρίων, προάγει την αντικειμενοποίηση της διαγνωστικής διαδικασίας και παρέχει υψηλή διαγνωστική ακρίβεια. Παράλληλα, η δυνατότητα εφαρμογής επικουρικών τεχνικών στο δείγμα, ενισχύει τον διαγνωστικό ρόλο της FNA θυρεοειδούς, συμβάλλοντας αποφασιστικά στην αντιμετώπιση ασθενών γενικού νοσοκομείου, με οζώδεις παθήσεις του θυρεοειδούς αδένα.