Γονιδιακές διαταραχές στον καρκίνο του παχέος εντέρου

Abstract

The purpose of this work is to study the potential application of molecular techniques in material obtained by ThinPrep ® brushings from normal mucosa and cancerous lesions of the colon. Specifically, we detected the mutations on Kras gene. We deteced the ploidy status of colon cancer cells and we calculate the S Phase Fraction during the analysis of the cell cycle, with the prospect of using these techniques in targeted therapy. We have collected 244 samples, 122 couples of samples from the adenocarcinomas and the adjacent normal mucosa. The results support that the ThinPrep ® is an excellent choice for receiving and storing samples for analysis by molecular biology techniques, as it is possible the identification of aneuploidies and the amplification of large segments of DNA and RNA. The rates of mutations of KRAS in our material, kept pace with internationally published results of large multicenter studies, with the exception of the increased mutation of the glycine codon 12 cysteine that occurs in nearly triple the rate compared to international reference studies such as RASCAL II. The finding requires further investigation on a larger sample to check a) the statistical significance of the Greek population, and b) the specificity of these patients were compared with the treatment and prognosis. In our sample, the percentage of aneuploidy samples approaching 45% and near diploid samples the 18%, which is comparable with international published studies. The 85.5% of adenocarcinomas with aneuploidy staged as T3 or T4, while only 14.5% as T2. The 86.4% of the near diploid adenocarcinoma samples was staged as T3 or T4. On the aneuploid cases the 56.4% had metastases in regional lymph nodes, while in patients with near diploid carcinoma cells the 40.1% had metastases in regional lymph nodes. The patients who had three diferent clones cells (based in the ploidy status), already had developed metastases in the regional lymph nodes. These findings suggest the decision making of an aggressive therapeutic approach by the treating physician (oncologist and/or surgeon). In conclusion, taking material from carcinomas of the colon in ThinPrep® makes possible the thorough analysis of molecular characteristics.

Η κυτταρολογία υγρής φάσης στην ανάλυση του κυτταρικού κύκλου και των γονιδιακών διαταραχών στον καρκίνο του παχέως εντέρου. Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι η διερεύνηση των δυνατοτήτων εφαρμογής μοριακών τεχνικών σε υλικό που ελήφθη με ψήκτρα από φυσιολογικό βλεννογόνο και από καρκινικές αλλοιώσεις του παχέος εντέρου, και αποθηκεύτηκε-διατηρήθηκε σε διάλυμα κυτταρολογίας υγρής φάσης ThinPrep®. Ειδικότερα, έγινε διερεύνηση των δυνατοτήτων εφαρμογής της μεθόδου (ThinPrep®) για την ανίχνευση μεταλλάξεων του Kras, την ανίχνευση ανευπλοειδιών και την ανάλυση του κυτταρικού κύκλου, με την προοπτική της χρήσης των τεχνικών αυτών στην στοχευμένη θεραπεία. Συλλέχθηκαν 244 δείγματα, 122 ζεύξη δειγμάτων από αδενοκαρκίνωματα και παρακείμενο φυσιολογικό βλεννογόνο. Τα αποτελέσματα υποστηρίζουν πως το ThinPrep® αποτελεί εξαιρετική επιλογή για την λήψη και αποθήκευση δειγμάτων που προορίζονται για ανάλυση με τεχνικές μοριακής βιολογίας, καθώς είναι εφικτός ο προσδιορισμός ανευπλοειδιών και ο πολλαπλασιασμός μεγάλων τμημάτων DNA και RNA.Τα ποσοστά των μεταλλαγών του KRAS του δείγματός μας, συμβάδισαν με τα διεθνώς δημοσιευμένα αποτελέσματα μεγάλων πολυκεντρικών ερευνών, με μόνη εξαίρεση την αυξημένη μεταλλαγή της γλυκίνης του κωδικονίου 12 σε κυστεΐνη που εμφανίζεται σε σχεδόν τριπλάσιο ποσοστό σε σύγκριση με διεθνείς μελέτες αναφοράς όπως η RASCAL ΙΙ. Tο εύρημα χρήζει περεταίρω διερεύνησης σε μεγαλύτερο δείγμα για να ελεγχθεί α) η στατιστική σημαντικότητα του στον Ελληνικό πληθυσμό, αλλά και β) η ιδιαιτερότητα των ασθενών αυτών σε σχέση με την θεραπευτική αγωγή και την πρόγνωση. Στο δείγμα μας το ποσοστό των ανευπλοειδικών δειγμάτων πλησιάζει το 45% και των περιδιπλοειδικών το 18%, ποσοστό που είναι αντίστοιχο με τις διεθνείς δημοσιευμένες μελέτες. Το 85,5% των αδενοκαρκινωμάτων με ανευπλοειδία σταδιοποιήθηκαν ως Τ3 ή Τ4, ενώ μόνο το 14,5% ως Τ2. Τα περιδιπλοειδικά αδενοκαρκινώματα σταδιοποιήθηκαν ως Τ3 ή Τ4 στο 86,4%. Εκ των ανευπλοειδικών περιστατικών το 56,4% παρουσίασε μεταστάσεις σε επιχώριους λεμφαδένες, ενώ εκ των περιδιπλοειδικών το 40,1%. Όσα περιστατικά είχαν τρεις κλώνους κυττάρων, είχαν ήδη αναπτύξει μεταστάσεις σε επιχώριους λεμφαδένες. Τα ευρήματα αυτά συνηγορούν στην επιλογή επιθετικότερης θεραπευτικής προσέγγισης από τον θεράποντα ιατρό (ογκολόγο και/ή χειρουργό). Συμπερασματικά, η λήψη υλικού από καρκινώματα του παχέος εντέρου σε ThinPrep® καθιστά εφικτή την διεξοδική ανάλυση των μοριακών χαρακτηριστικών τους.