ΕΝΖΥΜΙΚΟΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΑΛΑΤΩΝ ΤΟΥ ΜΕ ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΙΑ ΕΓΧΥΣΕΩΣ ΣΕ ΣΥΝΕΧΗ ΡΟΗ (F.I.A) ΚΑΙ ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΣΕ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΤΡΟΦΙΜΩΝΚΑΙ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΥΓΡΩΝ

Abstract

THE OBJECTIVE OF THIS WORK IS THE DEVELOPMENT OF ENZYMATIC METHODS TOWARDS THE DETERMINATION OF L-GLUTAMIC ACID IN FOOD SAMPLES, PHARMACEUTICAL AND BIOLOGICAL SAMPLES. GLUTAMATE OXIDASE IS IMMOBILIZED ON NON POROUS GLASS BEADS FOR THE CONSTRUCTION OF SINGLE BEAD STRING REACTORS AND GLUTAMATE DEHYDROGENASE ON AMINOPROPYL-CONTROLLED PORE GLASS (CPG) AS WELL AS ISOTHIOCYANATE-CPG, FOR THE CONSTRUCTION OF PACKED BED REACTORS. IN CASE OF GLUTAMATE OXIDASE THE H2O2 PRODUCED, IS CAUSED TO REACT WITH TRINDER'S REAGENT AND THE QUINONEIMINE DYE ISTHEN MONITORED AT 510NM. BY USING GLUTAMATE DEHYDROGENASE, THE NADH PRODUCEDIS PROPORTIONAL TO THE ORIGINAL CONCENTRATION OF GLUTAMIC ACID AND IT IS MEASURED FLUORIMETRICALLY AT AN EXCITATION WAVELENGTH OF 340NM AND AN EMISSION WAVELENGTH OF 460NM. TWO AUTOMATED FLOW INJECTION ANALYSIS SYSTEMS WERE USED AND SEVERAL PARAMETERS WERE STUDIED FOR THE ESTABLISHMENT OF THE OPTIMUM OPERATING CONDITIONS. ANALYTICAL WORKING CURVES ARE LINEAR IN THE RANGE 1-200ΜMOL/LFOR PACKED BED REACTORS AND 10-350ΜMOL/L FOR THE SINGLE BEAD STRING REACTOR. THE PROPOSED METHODS OFFER GOOD SENSITIVITY, PRECISION, ACCURACY AND SIMPLICITY.

ΑΝΤΙΚΕΙΜΕΝΟ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΕΙΝΑΙ Η ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΜΕΘΟΔΩΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΤΟΥ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΑΛΑΤΩΝ ΤΟΥ ΣΕ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΚΑΙ ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΥΓΡΑ. Η ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗ ΟΞΕΙΔΑΣΗ ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΠΑΝΩ ΣΕ ΜΗ ΠΟΡΩΔΗ ΓΥΑΛΙΝΑ ΣΦΑΙΡΙΔΙΑ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΩΝ ΑΠΛΗΣ ΔΙΑΤΑΞΗΣ ΣΦΑΙΡΙΔΙΩΝ ΚΑΙ Η ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗ ΔΕΥΔΡΟΓΟΝΑΣΗ ΣΕ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΠΑΡΑΓΩΓΑ ΠΟΡΩΔΟΥΣ ΥΑΛΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ ΚΑΤΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΩΝ ΠΑΤΕΝΤΑΡΙΣΜΕΝΗΣ ΚΛΙΝΗΣ. ΣΤΗΝ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΤΗΣ ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗΣ ΟΞΕΙΔΑΣΗΣ, ΤΟ ΠΑΡΑΓΟΜΕΝΟ H2O2 ΔΕΣΜΕΥΕΤΑΙ ΑΠΟ ΤΟ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ TRINDER ΚΑΙ Η ΠΑΡΑΓΟΜΕΝΗ ΧΡΩΣΤΙΚΗ ΠΑΡΑΚΟΛΟΥΘΕΙΤΑΙ ΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΑ ΣΕ ΜΗΚΟΣ ΚΥΜΑΤΟΣ 510NM. ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΩΝΤΑΣ ΤΗ ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗ ΔΕΥΔΡΟΓΟΝΑΣΗ, ΤΟ ΠΑΡΑΓΟΜΕΝΟ NADH ΜΕΤΡΑΤΑΙ ΦΘΟΡΙΣΜΟΜΕΤΡΙΚΑ ΣΕ ΜΗΚΟΣ ΚΥΜΑΤΟΣ ΔΙΕΓΕΡΣΗΣ 340NM ΚΑΙ ΜΗΚΟΣ ΚΥΜΑΤΟΣ ΕΚΠΟΜΠΗΣ 460NM. ΔΥΟ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΔΙ'ΕΓΧΥΣΕΩΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΣΕ ΣΥΝΕΧΗ ΡΟΗ (F.I.A) ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΝΤΑΙ ΓΙ'ΑΥΤΟ ΤΟ ΣΚΟΠΟ, ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΩΝΤΑΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΥΡΕΣΗ ΤΩΝ ΒΕΛΤΙΣΤΩΝ ΣΥΝΘΗΚΩΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ. ΟΙ ΚΑΜΠΥΛΕΣ ΑΝΑΦΟΡΑΣ ΠΟΥ ΧΑΡΑΣΟΝΤΑΙ, ΕΙΝΑΙ ΓΡΑΜΜΙΚΕΣ ΣΤΗΝ ΠΕΡΙΟΧΗ 1-200ΜMOL/L ΓΙΑ ΤΟΥΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΕΣ ΠΑΚΕΤΑΡΙΣΜΕΝΗΣ ΚΛΙΝΗΣ ΚΑΙ 10-350ΜMOL/L ΓΙΑ ΤΟΥΣ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΟΥΣ ΑΠΛΗΣ ΔΙΑΤΑΞΗΣ ΣΦΑΙΡΙΔΙΩΝ. ΟΙ ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΠΡΟΣΦΕΡΟΥΝ ΚΑΛΗ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ, ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΚΑΙ ΑΠΛΟΤΗΤΑ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ.