ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΡΑΔΙΟΜΕΤΡΙΚΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΤΗΣ ΒΙΟΤΙΝΙΔΑΣΗΣ ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ

Abstract

ΣΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΑ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΡΑΔΙΟΜΕΤΡΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΗΣ ΕΝΕΡΓΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΒΙΟΤΙΔΙΝΑΣΗ ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ. ΣΕ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΒΙΟΤΙΔΙΝΑΣΗ ΑΠΟΔΙΔΕΤΑΙ ΤΟ ΚΛΙΝΙΚΟ ΣΥΝΔΡΟΜΟ ΤΟΥ ΜΕΤΑΓΕΝΕΣΤΕΡΗΣ ΕΦΟΔΟΥ ΤΥΠΟΥ ΤΗΣ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑΣ ΤΩΝ ΚΑΡΒΟΞΥΛΑΣΩΝ. ΤΟ ΣΥΝΔΡΟΜΟ ΑΥΤΟ ΕΜΦΑΝΙΖΕΤΑΙ ΣΕ ΝΕΟΓΕΝΝΗΤΑ ΜΕ ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΑ ΠΟΥ ΚΑΤΑΛΗΓΟΥΝ ΣΤΟ ΘΑΝΑΤΟ. Η ΕΓΚΑΙΡΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΗΣ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΕΙΝΑΙ ΣΩΤΗΡΙΑ ΓΙΑ ΤΗ ΖΩΗ, ΑΦΟΥ ΜΕ ΧΟΡΗΓΗΣΗ ΒΙΤΑΜΙΝΗΣ ΒΙΟΤΙΝΗΣ-ΕΦ'ΟΡΟΥ ΖΩΗΣ-ΤΑ ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΑ ΥΠΟΧΩΡΟΥΝ ΚΑΙ Ο ΑΣΘΕΝΗΣ ΖΕΙ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΑ. ΣΥΝΤΕΘΗΚΑΝ Η ΡΑΔΙΟΙΩΔΙΩΜΕΝΗ ΜΕ 125Ι ΒΙΟΤΙΝΥΛΟ-ΚΡΑΜΙΝΗ ΚΑΙ Η ΨΥΧΡΗ ΒΙΟΤΙΝΥΛΟ- ΙΩΔΟ-ΤΥΡΑΜΙΝΗ ΓΙΑ ΝΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΟΥΝ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΓΙΑ ΤΗ ΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ. ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΜΕ ΤΟ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ, ΥΠΟΛΟΓΙΣΤΗΚΑΝ ΤΙΜΕΣ ΚM ΚΑΙ ΚI ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΒΙΟΤΙΝΗΣ(ΤΟ ΦΥΣΙΚΟ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΤΗΣ ΒΙΟΤΙΝΑΣΗΣ). ΕΓΙΝΑΝ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΧΡΟΝΙΚΗΣ ΜΕΛΕΤΗΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΜΕ ΤΟ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΚΑΙ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΜΕΘΟΔΟΣ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙ ΤΗΝ ΑΒΙΔΙΝΗ ΩΣ ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΗ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΚΑΙ ΤΗΝ ΠΟΛΥΑΙΘΥΛΕΝΟΓΛΥΚΟΖΗ ΩΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ. Η ΜΕΘΟΔΟΣ ΒΡΕΘΗΚΕ ΝΑ ΕΙΝΑΙ ΠΟΛΥ ΕΥΑΙΣΘΗΤΗ ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΑ ΜΕ ΤΙΣ ΜΕΘΟΔΟΥΣ ΤΗΣ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑΣ, ΑΦΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΜΟΝΟ 4ΜL, ΑΡΑ ΓΙΑ ΤΗ ΜΕΤΡΗΣΗ, ΕΠΑΝΑΛΗΨΙΜΗ ΚΑΙ ΓΡΗΓΟΡΗ, ΑΦΟΥ ΜΠΟΡΟΥΝ ΝΑ ΜΕΤΡΗΘΟΥΝ ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΑ ΑΠΟ 100 ΔΕΙΓΜΑΤΑΣΕ ΧΡΟΝΟ ΛΙΓΟΤΕΡΟ ΑΠΟ 3 ΩΡΕΣ.

THE PHD THESIS IS "DEVELOPMENT OF A RADIOMETRIC ASSAY FOR THE DETERMINATION OFBIOTINIDASE ACTIVITY IN HUMAN SERUM". THE CLINICAL SYNDROM OF MULTIPLE CARBOXYLASE DEFICIENCIES ASCRIBED TO BIOTINIDASE DEFICIENCY WHICH APPEARS IN REONATES WITH SYMPTOMS THAT LEADTO DEATH. EARLY DIAGNOSIS OF THE DISEASE IS A LIFE-SAVING PROCEDURE SINCE ALL SYMPTOMS DISAPPEAR AFTER BIOTIN TREATMENT FOR A LIFE TIME AND, THIS, PATIENTS WITH BIOTINIDASE DEFICIENCY LIVE NORMALLY. RADIOIODINATED WITH 125I BIOTIL-TYRAMINE AND ITS COLD COUNTERPART WERE SYNTHESIZED IN ORDER TO BE BIOTINIDASE SUBSTRATE. THE ENZYME KINETICS, WITH THE NEW SUBSTRATE, WERE STUDIED AND THE KM VALUES, V MAXIMUM AND KI (IN THE PRESENT OF THE NATURAL SUBSTRATE BIOCYTIN) WERE DETERMINED. THE METHOD ALSO INCLUDES ARIDIN AS A BINDING PROTEIN, AND POLYETHYLENE GLYCOL AS A SEPARATION REAGENT. THE METHOD WAS FOUND TO BE VERY SENSITIVE, SINCE USES ONLY 4ML OF HUMAN SERUM FOR THE MEASUREMENT, REPRODUCIBLE, SIMPLE AND FAST SINCE MORE THAN 100 SAMPLES CAN BE MEASURED IN LESS THAN 3 HOURS.