Μελέτη της μετατροπής των αρχέγονων αιμοποιητικών κυττάρων σε μυοκαρδιακά κύτταρα εντός συστήματος υγρής καλλιέργειας μακράς διάρκειας

Abstract

The aim of the study is to investigate the ability of bone marrow mesenchymal stem cells to differentiate toward cardiomyocytes in ligand culture. Bone marrow samples were aspirated from 30 patients undergoing open heart surgery. Mesenchymal stem cells were isolated and expanded in culture. Second passaged cells were treated with 10μΜ 5-azacytidine. Immunophenotype was detected with flow cytometry. Morphology was analyzed with contrast and electron microscopy. Vimentin and myosin heavy chain production were analyzed by immunohistochemistry. Expression of α-cardiac actin, b-myosin heavy chain and troponin-T was also analyzed with molecular studies. In treated cells, multiple myofilaments were detected that were positive immunohistochemically to myosin heavy chain. All studied genes were also expressed. In untreated cells not expanded in culture, all myocardial markers were negative.

Σκοπός της παρούσας μελέτης αποτελεί η διερεύνηση της ικανότητας των αρχέγονων μεσεγχυματικών κυττάρων του μυελού των οστών να μετατρέπονται σε μυοκαρδιακά κύτταρα του μυελού των οστών να μετατρέπονται σε μυοκαρδιακά κύτταρα σε σύστημα υγρής καλλιέργειας. Δείγματα μυελού ελήφθησαν από 30 ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση ανοικτής καρδιάς. Τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα απομονώθηκαν και τοποθετήθηκαν σε καλλιέργεια. Μετά τη δεύτερη ανακαλλιέργεια έγινε επίδραση 10μ.Μ 5-αζακυτιδίνης. Ο ανοσοφαινότυπος προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Η μελέτη της μορφολογίας διενεργήθηκε με το ανάστροφο καθώς και με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Πραγματοποιήθηκε ανοσοϊστοχημικός έλεγχος της βιμεντίνης και της βαριάς αλύσου της μυοσίνης. Μελετήθηκε παράλληλα η έκφραση των γονιδίων της α-καρδιακής ακτίνης και της β-βαριάς αλύσου της μυοσίνης και της τροπονίνης-Τ. Στα κύτταρα που υποβλήθηκαν στην επίδραση ανιχνεύτηκαν πολυάριθμα ινίδια, τα οποία ήταν θετικά με ανοσοϊστοχημεία στη βαριά άλυσο μυοσίνης. Παράλληλα διαπιστώθηκε έκφραση των υπό μελέτη γονιδίων. Αντίθετα, σε κύτταρα πολύ δεν υποβλήθηκαν σε καλλιέργεια, δε διαπιστώθηκε έκφραση μυοκαρδιακών δεικτών.