ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΗ, ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΚΦΡΑΣΗ -ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΑΠΟ ΤΑ ΠΑΘΟΓΟΝΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑ SALMONELLA TYPHI ΚΑΙ MYCOLACTERIUM TUBERCULOSIS: ΣΥΜΒΟΛΗ ΣΤΗΝ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΖΩΝΤΑΝΩΝ Ε...

Abstract

THIS PROJECT WAS UNDERTAKEN AS A MEANS OF STUDYING THE AROMATIC PATHWAYS OF THEPATHOGENES S.TYPHI AND M.TUBERCULOSIS. PATHOGENIC ORGANISMS WITH GENETIC LESIONS IN GENES INVOLVED IN AROMATIC PATHWAYS GROW POORLY IN VIVO AND ARE OF POTENTIAL USE AS LIVE VACCINES. WE HAVE CLONED, SEQUENCED AND CHARACTERIZED THE AROD GENE FROM S.TYPHI AND THE AROQ AND AROB GENES FROM M.TUBERCULOSIS . A COMMON ANCESTRAL ORIGIN EXISTS FOR GENES ENCODING THE CATABOLIC DEHYDROQUINASES OF FUNGIAND THE BIOSYNTHETIC DEHYDROQUINASES PRESENT IN SOME PROKARYOTS. THE AROQ GENEHAS BEEN OVEREXPRESSED IN E.COLI UP TO 10% OF TOTAL CELL PROTEIN. ALSO WE HAVESHOWN THAT THE COMMERCIALLY AVAILABLE RESTRICTION ENZYME BSPHI IS BLOCKED BY OVERLAPPING DAM-METHYLATION.

ΤΟ ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΟ ΑΥΤΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΕΓΙΝΕ ΜΕ ΣΚΟΠΟ ΤΗΝ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΑΡΩΜΑΤΙΚΩΝ ΜΟΝΟΠΑΤΙΩΝ ΤΩΝ ΠΑΘΟΓΟΝΩΝ S.TYPHI ΚΑΙ Μ.TUBERCULOSIS. ΠΑΘΟΓΟΝΟΙ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟΙ ΜΕ ΓΕΝΕΤΙΚΕΣ ΑΛΛΑΓΕΣ ΣΕ ΓΟΝΙΔΙΑ ΠΟΥ ΕΜΠΛΕΚΟΝΤΑΙ ΣΕ ΑΡΩΜΑΤΙΚΑ ΜΟΝΟΠΑΤΙΑ ΑΝΑΠΤΥΣΣΟΝΤΑΙ ΛΙΓΟ IN VIVO ΚΑΙ ΜΠΟΡΟΥΝ ΝΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΟΥΝ ΩΣ ΖΩΝΤΑΝΑ ΕΜΒΟΛΙΑ. ΚΛΩΝΟΠΟΙΗΣΑΜΕ, ΑΝΑΛΥΣΑΜΕ ΤΗΝ ΑΚΟΛΟΥΘΙΑ ΚΑΙ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΑΜΕ ΤΟ AROD ΓΟΝΙΔΙΟ ΤΗΣ S. ΤΥΡΗΙ ΚΑΙ ΤΑ ARODQ ΚΑΙAROB ΓΟΝΙΔΙΑ ΤΟΥ M.TUBERCULOSIS. MIA ΚΟΙΝΗ ΦΥΛΟΓΕΝΕΤΙΚΗ ΑΡΧΗ ΥΠΑΡΧΕΙ ΓΙΑ ΤΑ ΓΟΝΙΔΙΑ ΠΟΥ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΝ ΤΙΣ ΚΑΤΑΒΟΛΙΚΕΣ ΔΕΝΔΡΟΓΟΝΑΣΕΣ ΤΩΝ ΜΥΚΗΤΩΝ ΚΑΙ ΤΙΣ ΒΙΟΣΥΝΘΕΤΙΚΕΣ ΔΕΥΔΡΟΓΟΝΑΣΕΣ ΠΟΥ ΥΠΑΡΧΟΥΝ ΣΕ ΚΑΠΟΙΟΥΣ ΠΡΟΚΑΡΙΩΤΙΚΟΥΣ ΟΡΓΑΝΙΣΜΟΥΣ . ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ AROQ ΥΠΕΡΠΑΡΑΧΘΗ ΣΤΗΝ E.COLI ΣΕ ΠΟΣΟΣΤΟ 10% ΤΗΣ ΟΞΙΚΗΣ ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ. ΕΠΙΣΗΣ ΔΕΙΞΑΜΕ ΟΤΙ ΤΟ ΕΜΠΟΡΙΚΑ ΔΙΑΘΕΣΙΜΟ ΕΝΖΥΜΟ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΥ BEPHI ΕΙΝΑΙΕΥΑΙΣΘΗΤΟ ΣΕ DAM- ΕΠΙΚΑΛΥΠΤΟΜΕΝΗ ΜΕΘΥΛΙΩΣΗ.