Ανάπτυξη μεθόδων προσδιορισμού σιαλικών οξέων σε βιολογικά υγρά.

Abstract

ΤΑ ΣΙΑΛΙΚΑ ΟΞΕΑ,ΜΙΑ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑ ΠΑΡΑΓΩΓΩΝ ΤΟΥ ΝΕΥΡΑΜΙΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ,ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΟΥΝ ΕΝΤΟΝΟ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΟ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΤΙΚΟ ΕΝΔΙΑΦΕΡΟΝ ΚΥΡΙΩΣ ΛΟΓΩ ΤΗΣ ΙΔΙΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥΣ ΩΣ ΔΕΙΚΤΕΣ ΚΑΡΚΙΝΟΥ.Η ΠΑΡΟΥΣΑ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΣΥΝΕΙΣΦΕΡΕΙ ΣΤΗΝ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΑΝΑΛΥΤΙΚΩΝ ΜΕΘΟΔΩΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΤΩΝ ΣΙΑΛΙΚΩΝ ΟΞΕΩΝ ΣΕ ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΚΑΙ ΕΙΔΙΚΟΤΕΡΑ:Α)ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΗΣ ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΥΠΕΡΙΩΔΙΚΩΝ-ΡΕΖΟΡΚΙΝΟΛΗΣ.Η ΒΕΛΤΙΩΜΕΝΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΟΡΘΟΤΗΤΑ,ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ,ΑΚΡΙΒΕΙΑ,ΤΑΧΥΤΗΤΑ ΚΑΙ ΧΑΜΗΛΟ ΚΟΣΤΟΣ,ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΟΥ ΕΛΕΥΘΕΡΟΥ, ΔΕΣΜΕΥΜΕΝΟΥ ΚΑΙ ΟΛΙΚΟΥ Ν-ΑΚΕΤΥΛΟΝΕΥΡΑΜΙΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ(ΝΑΝΑ) ΣΤΟΝ ΟΡΟ ΚΑΙ ΣΤΑ ΟΥΡΑ.Β)ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΕΩΣ ΟΞΕΙΔΩΣΕΩΣ ΤΟΥ ΝΑΝΑ ΜΕ ΤΑ ΥΠΕΡΙΩΔΙΚΑ.ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΤΑΙ Η ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ ΟΞΕΙΔΩΣΕΩΣ ΤΟΥ ΝΑΝΑ ΜΕ ΤΑ ΥΠΕΡΙΩΔΙΚΑ,ΠΑΡΑΚΟΛΟΥΘΩΝΤΑΣ ΤΗ ΜΕΙΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΟΡΡΟΦΗΣΗΣ ΣΤΑ 224NM.Γ)ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΑΝΤΙΣΤΡΟΦΟΥ ΦΑΣΗΣ-ΙΟΝΤΙΚΩΝ ΖΕΥΓΩΝ.ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ΑΝΤΙΣΤΡΟΦΟΥ ΦΑΣΗΣ-ΙΟΝΤΙΚΩΝ ΖΕΥΓΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΠΕΝΤΕ ΕΠΙΛΕΓΜΕΝΩΝ ΣΙΑΛΙΚΩΝ ΟΞΕΩΝ ΜΕ ΒΙΟΛΟΓΙΚΗ ΣΗΜΑΣΙΑ.ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ Η ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟΥ ΙΟΝΤΙΚΩΝ ΖΕΥΓΩΝ,ΤΟ PH,Η ΡΟΗ ΚΙΝΗΤΗΣ ΦΑΣΗΣ ΚΑΙ Η ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΟΡΓΑΝΙΚΩΝ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΤΩΝ.ΩΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΙΟΝΤΙΚΩΝ ΖΕΥΓΩΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΓΙΑ ΠΡΩΤΗ ΦΟΡΑ ΟΙ ΤΡΙΤΟΤΑΓΕΙΣ ΑΜΙΝΕΣ ΤΡΙΑΙΘΑΝΟΛΑΜΙΝΗ ΚΑΙ ΤΡΙΙΣΟΠΡΟΠΑΝΟΛΑΜΙΝΗ ΚΑΙ ΤΟ ΑΛΑΣ ΤΗΣ ΤΕΤΑΡΤΟΤΑΓΟΥΣ ΑΜΙΝΗΣ ΒΡΩΜΙΟΥΧΟ ΤΕΤΡΑΟΚΤΥΛΑΜΜΩΝΙΟ.Η ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΑ ΣΤΑ 215NM.ΑΠΟ ΤΑ ΑΝΑΛΥΤΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ,ΣΥΜΠΕΡΑΙΝΕΤΑΙ ΟΤΙ Η ΜΕΘΟΔΟΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΑΞΙΟΠΙΣΤΙΑ,ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ,ΕΚΛΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ,ΤΑΧΥΤΗΤΑ ΚΑΙ ΜΙΚΡΟ ΚΟΣΤΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ.Δ)ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΤΗΣ ΑΝΑΠΤΥΧΘΕΙΣΑΣ ΥΓΡΟΧ

THE ANALYTICAL INTEREST FOR SIALIC ACIDS,A FAMILY OF NEURAMINIC ACID,IS MAINLY DUE TO THEIR DIAGNOSTIC VALUE AS TUMOR MARKERS AND IN THE DIAGNOSIS OF LYSOSOMAL STORAGE DISEASES.THE PRESENT THESIS CONTRIBUTES TO THE DEVELOPMENT OF ANALYTICAL METHODS FOR THE DETERMINATION OF SIALIC ACIDSIN BIOLOGICAL FLUIDS AND MORE SPECIFICALLY.1.IMPROVEMENT OF THE SPECTROPHOTOMETRIC METHOD OF PERIODATE-RESORCINOL.THE IMPROVED METHOD IS ACCURATE,SENSITIVE,PRECISE,SIMPLE AND ABLE TO DETERMINE FREE,BOUND AND TOTAL SIALIC ACID IN SERUM AND URINE.2.KINETIC STUDY OF OXIDATION REACTION OF N-ACETYLNEURAMINIC ACID(NANA) WITH PERIODATE.FOR THE FIRST TIME,A SPECTROPHOTOMETRIC KINETIC STUDY OF OXIDATION REACTION OF NANA WITH PERIODATE IS PRESENTED,BY MONITORING THE DECREASE OF ABSORBANCE AT 244NM.3.DEVELOPMENT OF REVERSED-PHASE ION PAIRING HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY.FOR THE FIRST TIME,A REVERSED PHASE ION-PAIR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC METHOD WAS DEVELOPED FOR THE DETERMINATION OF FIVE SELECTED SIALIC ACIDS WITH BIOLOGICAL SIGNIFICANCE.THE EXPERIMENTAL CONDITIONS WERE OPTIMIZED IN RESPECT TO THE CONCENTRATION OF ION-PAIRING REAGENT,PH,FLOW RATE AND THE PRESENCE OF ORGANIC MODIFIERS IN ORDER TO SEPARATE THE MIXTURE OF SIALIC ACIDS.FOR THE FIRST TIME,THE TERTIARY AMINES,TRIETHANOLAMINE AND TRIISOPROPANOLAMINE AND THE SALT OF QUATERNARY AMINE,TETRAOCTYLAMMONIUM BROMIDE WERE USED.DETECTION WAS CARRIED OUT AT 215NM.FROM THE ANALYTICAL CHARACTERISTICS,THE METHOD IS ACCURATE,SENSITIVE,SPECIFIC,AND INEXPENSIVE. 4.ANALYTICAL APPLICATIONS OF THE CHROMATOGRAPHIC METHOS FOR THE DETERMINATION OF SIALIC ACIDS IN BIOLOGIC