ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗΣ ΑΦΥΔΡΟ- ΓΟΝΑΣΗΣ ΣΤΟΝ ΠΟΝΤΙΚΟ ΚΑΙ ΣΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΟ:ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ GLUD1 ΣΕ ΟΡΙΣΜΕΝΕΣ ΜΟΡΦΕΣ ΝΕΥΡΟΛΟΓΙΚΩΝ ΔΙΑΤΑΡΑΧΩΝ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ

Abstract

THE AIM OF THIS STUDY WAS THE STRUCTURAL AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF GLUTAMATEDEHYDROGENASE GENE FAMILY BOTH IN MOUSE AND HUMAN AND ALSO THE ELUCIDATION OF THE MOLECULAR BASIS OF FAMILIAR AND SPORADIC FORMS OF CERTAIN HUMAN DEGENERATIVE DISORDERS ASSOCIATED WITH A DEFICIENCY OF GLUTAMATE DEHYDROGENASE. IN THIS CONTEST WE ISOLATED AND CHARACTERAZED A FULL LENGTH MOUSE BRAIN GLUDCDNA. MAPPING STUDIES BY USING A WELL-CHARACTERIZED PANEL OF SOMATIC CELL HYBRIDS REVEALED THE EXISTENCE OF TWO MOUSE GLUTAMATE DEHYDROGENASE GENES LOCATED ON CHROMOSONE 14 (GLUD) AND 7 (GLUD-2). PERLIMINARY ANALYSISOF THESE LOCI REVEALED THAT THE GLUD LOWER IS THE FUNCTIONAL GENE, WHILE GLUD-2 RAPRESENTS A FRUNCAFED PSEUDOGENE. THE STUCTURE OF THE PROMOTOR OF GLUD GENE HAS THE CHARACTERISTICS OF THE HOUSEKEE PING PROMOTERS. NORTHERN BLOT ANALYSIS REVEALED THE PRESENCE OF TWO GLUD MRNAS SPECIES DIFFERING BOTH IN SIZE AND THE RELATIVE ABUNDANCES. PRELIMINARY SOUTHERN BLOT ANALYSIS SHOWED A COMPLEX HYBRIDIZATION PATTERN IN AGGREEMENT WITH THE PRESENCE OF A SMALL GLUDGENE FAMILY INHUMANS. THE DECREASED GLUD MRNA LEVELS IN PATIENTS WITH OLIVOPONTOCEREBELLAR ATROPHY ARE NOT DUE TO MUTATIONS IN GLUD1 LOCUR.

ΣΚΟΠΟΣ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ ΗΤΑΝ Η ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΔΟΜΗΣ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΗΣ ΑΦΥΔΡΟΓΟΝΑΣΗΣ (GLUD)ΣΕ ΔΥΟ ΠΟΛΥ ΟΜΟΛΟΓΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΒΑΣΗΣ ΟΡΙΣΜΕΝΩΝ ΟΙΚΟΓΕΝΩΝ ΚΑΙ ΣΠΟΡΑΔΙΚΩΝ ΝΕΥΡΟΕΚΦΥΛΙΣΤΙΚΩΝ ΤΟΥ ΑΝΘΡΩΠΟΥ ΠΟΥ ΣΥΝΔΕΟΝΤΑΙ ΜΕ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΚΑΙ ΑΝΩΜΑΛΟ ΜΕΤΑΒΟΛΙΣΜΟΤΟΥ ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ. ΣΤΑ ΠΛΑΙΣΙΑ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΠΡΟΣΠΑΘΕΙΑΣ ΕΓΙΝΕ Η ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ Ο ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΜΟΡΙΩΝ GLUD CDUA. ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΙΚΗΣ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΕΔΕΙΞΑΝ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΓΕΝΕΤΙΚΩΝ ΤΟΠΩΝ ΓΙΑ ΤΗ GLUD ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΤΟΥ ΠΟΝΤΙΚΟΥ ΠΟΥ ΕΔΡΑΖΟΝΤΑΙ ΣΤΟ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑ 14 (GLUD) ΚΑΙ 7(GLUD-2). ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΗΚΕ ΤΟ ΣΗΜΕΙΟ ΕΝΑΡΞΗΣΤΗΣ ΜΕΤΑΓΡΑΦΗΣ ΚΑΙ Η 5 ΠΛΕΥΡΙΚΗ ΠΕΡΙΟΧΗ ΤΟΥ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ GLUD. Ο ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΚΑΙ ΠΟΣΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΩΝ ΕΠΙΠΕΔΩΝ GLUDMRNA ΑΠΟΚΑΛΥΨΕ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΔΥΟ ΜΕΤΑΓΡΑΦΩΝ ΠΟΥ ΔΙΑΦΕΡΟΥΝ ΤΟΣΟ ΣΤΟ ΜΕΓΕΘΟΣ ΟΣΟ ΚΑΙ ΣΤΗΝ ΣΧΕΤΙΚΗ ΑΦΘΟΝΙΑ ΤΟΥΣ. ΣΤΟΝ ΑΝΘΡΩΠΟ ΠΡΟΚΑΤΑΡΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΚΑΤΑ SOUTHERN ΑΠΟΚΑΛΥΨΕ ΕΝΑ ΠΟΛΥΠΛΟΚΟΠΡΟΤΥΠΟ ΥΒΡΙΔΟΠΟΙΗΣΗΣ ΥΠΟΔΕΙΚΛΥΟΝΤΑΣ ΕΤΣΙ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΜΙΑΣ ΜΙΚΡΗΣ ΓΟΝΙΔΙΑΚΗΣ ΟΙΚΟΓΕΝΕΙΑΣ ΓΙΑ ΤΗΝ GLUD. ΤΑ ΜΕΙΩΜΕΝΑ ΕΠΙΠΕΔΑ GLUD MRNAΣΕ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΜΕ ΕΛΑΙΟΓΕΦΥΡΟΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΙΚΗ ΑΤΡΟΦΙΑ ΔΕΝ ΦΑΙΝΕΤΑΙ ΝΑ ΟΦΕΙΛΟΝΤΑΙ ΣΕ ΚΑΠΟΙΑ ΕΝΔΕΧΟΜΕΝΗ ΜΟΡΙΑΚΗ ΒΛΑΒΗ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ GLUD1.