Η ΝΟΥΚΛΕΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ ΣΠΕΡΜΑΤΩΝ ΒΛΑΣΤΗΜΕΝΗΣ ΦΑΚΗΣ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕ- ΤΗ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΜΙΑΣ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗΣ

Abstract

ΜΙΑ ΝΕΑ ΕΝΔΟΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΠΟΥ Η ΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΕΞΑΡΤΑΤΑΙ ΑΠΟ ΤΗΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΚΑΤΙΟΝΤΩΝ ΑΣΒΕΣΤΙΟΥ ΑΠΟΜΟΝΩΘΗΚΕ ΑΠΟ ΣΠΕΡΜΑΤΑ ΦΑΚΗΣ ΠΟΥ ΒΛΑΣΤΗΣΑΝ ΕΠΙ 84 ΩΡΕΣ ΣΕ 21,5+ΙC ΑΠΟΥΣΙΑ ΦΩΤΟΣ ΜΕ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΣΕ ΣΤΗΛΕΣ ΚΑΘΑΡΙΣΘΗΚΕ 2000 ΦΟΡΕΣ. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΑΥΤΟ (ΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΤΗΣ ΦΑΚΗΣ) ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΤΟ PH 8 ΚΑΙ ΙΣΟΗΛΕΚΤΡΙΚΟ ΣΗΜΕΙΟ PI 4.6. ΕΙΝΑΙ ΜΟΝΟΜΕΡΕΣ, ΜΟΡΙΑΚΟΥ ΒΑΡΟΥΣ 39 KDA ΚΑΙ ΥΔΡΟΛΥΕΙ DNA, RNA ΚΑΙ ΤΟΝ 3' ΔΕΣΜΟ ΤΟΥ 3' _ΑΜΡ. ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΝΕΙ ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ ΜΕ ΤΗ ΦΩΣΦΟΡΙΚΗ ΟΜΑΔΑ ΣΤΗ 5' ΘΕΣΗ. Η ΠΡΟΤΙΜΗΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΣ ΤΑ ΦΥΣΙΚΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΑ ΚΑΙ ΣΥΝΘΕΤΙΚΑ ΟΜΟΠΟΛΥΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΑ ΑΚΟΛΟΥΘΕΙ ΤΗΝ ΕΞΗΣ ΣΕΙΡΑ: POLYU>SSDNA>POLYI>POLYA> DSDNA>SSRNA=DSRNA=POLYC>POLYG=0. ΟΠΩΣ ΠΡΟΚΥΠΤΕΙ ΑΠΟ ΤΗ ΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΑΠΕΝΑΝΤΙ ΣΤΟ ΕΠΙΣΗΜΑΣΜΕΝΟ ΣΤΗ 5' ΘΕΣΗ ΜΕ ^32Ρ ΔΕΟΞΥΔΕΚΑΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΟ D- ^32PCPCPTPGPGPCPAPG PTPT Η ΠΡΟΤΙΜΗΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΣ ΤΟΥΣ ΔΕΣΜΟΥΣ ΤΩΝ ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΩΝ ΑΚΟΛΟΥΘΕΙ ΤΗ ΣΕΙΡΑ: T PT>T PG>G PT=G PC>A PG>G PG>G PC= C PT= C PA=0. ΑΠΟ ΕΝΑΝ ΑΡΙΘΜΟ ΑΠΟΦΩΣΦΟΡΥΛΙΩΜΕΝΩΝ ΔΙΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΩΝ ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΜΟΝΟ ΤΟ GPC ΠΡΟΣ G ΚΑΙ PC. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΚΑΤΑ ΠΡΟΤΙΜΗΣΗ ΤΙΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΕΣ G PC ΚΑΙ C PG ΚΑΙ ΔΕΥΤΕΡΕΥΟΝΤΩΣ ΤΗΝ U PC, ΟΤΑΝ ΩΣ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΑΙ 5S RNA ΚΟΥΝΕΛΙΟΥ ΓΝΩΣΤΗΣ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΕΠΙΣΗΜΑΣΜΕΝΟ ΣΤΗ 5' ΘΕΣΗ ΜΕ Χ32Ρ. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΙΚΑ Η ΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΤΗΣ ΦΑΚΗΣ ΤΑΞΙΝΟΜΕΙΤΑΙ ΩΣ ΦΥΤΙΚΗ ΝΟΥΚΛΕΑΣΗ ΤΥΠΟΥ Ι (EC 3.I.30.2) ΠΟΥ ΥΔΡΟΛΥΕΙ ΚΑΤΑ ΠΡΟΤΙΜΗΣΗ ΔΕΣΜΟΥΣ Τ PN ΚΑΙ G PN (ΟΠΟΥ Ν ΕΙΝΑΙ ΕΝΑΣ ΟΠΟΙΟΣΔΗΠΟΤΕ ΝΟΥΚΛΕΟΖΙΤΗΣ) ΣΤΟ DNA ΚΑΙ G PC ΚΑΙ C PG ΣΤΟ RNA.

A NEW CALCIUM DEPENDENT ENDONUCLEASE WAS ISOLATED FROM LENTIL SEEDLINGS GERMINATED FOR 84 H IN THE ABSENCE OF LIGHT (AT 21.5=IC). A 2000-FOLD PURIFICATION WAS ACHIEVED BY EMPLOYING A VARIETY OF CHROMATGRAPHIC PROCEDURES. THE ENZYME(LENTIL NUCLEASE) ACTS OPTIMALLY AT PH 8, AND IT EXHIBITS A PI OF 4.6.; IT IS A 39 KDA MONOMER AND HYDROLYSES DNA, RNA AND THE 3' LINKAGE OF 3' -AMP. THE ENZYME FORMS PRODUCTS WITH THE MONOESTERIFIED PHOSPHATE AT THE 5' POSITION. PREFERENCE TOWARDS NATURAL SUBSTRATES AND SYNTHETIC HOMOPOLYRIBONUCLEOTIDES IS AS FOLLOWS: POLU>SSDNA>POLYI>POLYA>DSDNA>SSRNA=DSRNA=POLYC>POLYG=0.ITS BOND PREFERENCE AS TESTED AGAINST 5' X32P-LABEL-LED DEOXYDECANUCLEOTIDE D- X32 PC PCPTPGPGPCPAPGPTPT IS AS FOLLOWS:T PT>T PG>G PT=G PC>A PG >G PG>C PC=C PT= C PA=O. OUTOF A NUMBER OF DINUCLEOSIDE MONOPHOSPHATES IT HYDROLYZES ONLY THE GPC TO G PLUS PC. THE ENZYME HYDROLYZES PREFERENTIALLY GPC AND CPG SEQUENCES AND SECONDARILY THE U PC SEQUENCE WHEN TESTED AGAINST RABBIT 5S RNA OF KNOWH SEQUENCE. ITIS CONCLUDED THAT LENTIL NUCLEASE IS CLASSIFIED AS A PLANT NUCLEASE I(EC 3.I.30.2) THAT HYDROLYZES PREFERENTIALLY T PN AND G PN (IN WHICH N IS ANY NUCLEOSIDE) BONDS IN DNA AND G PC AND C PG BONDS IN RNA.