Loss of imprinting in normal and intrauterine growth restricted human placentas

Abstract

Loss of imprinting (LOI) is the gain of expression from the silent allele of an imprinted gene normally expressed from only one parental copy. LOI has been associated with neurodevelopmental disorders and reproductive abnormalities. The mechanisms of imprinting are varied, with DNA methylation representing only one. We have developed a functional transcriptional assay for LOI that is not limited to a single mechanism of imprinting. The method employs allele-specific PCR analysis of RT-PCR products containing common readout polymorphisms. With this method, we are able to measure LOI at the sensitivity of 1%. The method has been applied to measurement of LOI in human placentas.

Η απώλεια αποτύπωσης (LOI) είναι η αύξηση της έκφρασης από το σιωπηλό αλληλόμορφο ενός αποτυπωμένου γονιδίου που εκφράζεται κανονικά από ένα μόνο γονικό αντίγραφο. Το LOI έχει συσχετιστεί με νευροαναπτυξιακές διαταραχές και αναπαραγωγικές ανωμαλίες. Οι μηχανισμοί αποτύπωσης ποικίλλουν, με τη μεθυλίωση του DNA να αντιπροσωπεύει μόνο έναν. Έχουμε αναπτύξει μια λειτουργική μεταγραφική δοκιμασία για το LOI που δεν περιορίζεται σε έναν μόνο μηχανισμό αποτύπωσης. Η μέθοδος χρησιμοποιεί ανάλυση PCR ειδική για αλληλόμορφα προϊόντων RT-PCR που περιέχουν κοινούς πολυμορφισμούς ανάγνωσης. Με αυτήν τη μέθοδο, είμαστε σε θέση να μετρήσουμε το LOI με ευαισθησία 1%. Η μέθοδος έχει εφαρμοστεί στη μέτρηση του LOI σε ανθρώπινους πλακούντες.