Μελέτη του Τ-κυτταρικού υποπληθυσμού, της έκφρασης του HER2 και της Claudin 18.2 στο γαστρικό καρκίνωμα-Συσχέτιση με τη διαβάθμιση και το pTNM

Abstract

In recent years targeted therapies and immunotherapies are increasingly being developed for various types of cancer, especially in advance stage cancer depending on the type of cancer and its molecular profile. The research is directed towards the discovery of antigens-targets, whose elimination or destruction will lead to the destruction or neutralization of the cancer cell. The immune system’s activity and effectiveness have a key role in the treatment of cancer. To a large extent, the immune system’s activity is expressed by the density of the immune cell infiltration, especially the lymphocytic one and its composition. Nevertheless, the level of the effectiveness of the immune system’s activity is also determined by other factors, among which is the composition of the tumour microenvironment/immune microenvironment. The aim of the present study is the correlation and the comparative study of the density of TILs in the tumour stroma, their composition, the degree of expression of HER2 and Claudin 18.2 with various histopathological parameters of gastric adenocarcinoma. Claudin 18.2 is a protein molecule of the cell membrane that belongs to the group of tight junction molecules that form paracellular barriers and pores that determine the permeability of tight cell junctions and reacts with the tumour microenvironment. Eighty seven cases of gastric adenocarcinoma were studied in detail and specifically histopathological parameters, such as the depth of the tumour’s invasion (pT), the presence and grade of lymph node metastasis (pN), the presence or not of pathologically confirmed distant metastasis (pM), the tumour’s greatest dimension, the presence or absence of necrosis, the lymphovascular and perineural invasion, the grade of differentiation and the histologic type of the carcinoma. TILs density, immunohistochemically determined densities of CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm², along with the grade of HER2 and Claudin 18.2 expression were studied in an attempt to correlate/compare these findings with the above mentioned histopathological parameters, between them, as well as with all the studied parameters. The results of this study indicate that the decreased lymphocytic infiltration (TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm²) is related with increased depth of invasion, albeit less marked infiltration of TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm² was identified from the descriptive analysis of the lymph node metastasis at the levels of N3a and N3b. Consequently, the level of TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm² infiltration can be considered prognostic factors, while the grade of Claudin 18.2 expression does not constitute an independent prognostic factor beyond the fact that it shows a positive correlation with TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm². The greatest tumour dimension was negative correlated with the density of TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm² and also with the Claudin 18.2. A noteworthy finding, is that HER2 positive adenocarcinomas demonstrate decreased correlation with CD8/mm² and to a milder extent with TILs%, CD3/mm², CD20/mm², a fact that is indicative of an unfavorable prognostic factor. Another notable finding is that the Claudin 18.2 overexpression (IRS=12) was observed in a significantly lower percentage in the diffuse type (7,7) than in the intestinal type (26%). Overexpression of Claudin 18.2 was observed in 20,7% of the studied cases. The presence of tumour necrosis shows significant positive correlation with the depth of invasion, the greatest tumour dimension, the decreased levels of CD20/mm², and to a milder extent, the decreased presence of CD3/mm² and CD8/mm². A significant positive correlation of lymphovascular invasion and the greatest tumour dimension was also observed. Sex doesn’t show any statistically significant correlation with all the studied parameters apart from increased frequency of gastric adenocarcinoma in men. In view of all the reported findings in the present study, every case of gastric adenocarcinoma should be examined in detail and the above reported factors should be correlated, with other factors, as well, such as MSI, PDL-1, EBV, and potentially additional factors that may emerge from the ongoing relevant research, that is, to conduct a multifactorial study.

Τα τελευταία χρόνια ολοένα και περισσότερο αναπτύσσονται στοχεύουσες θεραπείες και ανοσοθεραπείες για διάφορα είδη καρκίνων ιδίως σε προχωρημένα στάδια, ανάλογα με το είδος του καρκίνου και το μοριακό του προφίλ. Οι έρευνες κατευθύνονται προς την ανεύρεση αντιγόνων-στόχων που η εξουδετέρωση αυτών ή η καταστροφή των θα οδηγήσει την καταστροφή ή αδρανοποίηση του καρκινικού κυττάρου. Σημαντικό ρόλο στην αντιμετώπιση του καρκίνου έχει η δράση του ανοσοποιητικού συστήματος και η αποτελεσματικότητα αυτού. Σε μεγάλο βαθμό η δράση του ανοσολογικού συστήματος εκφράζεται από την πυκνότητα της ανοσοκυτταρικής διήθησης, κυρίως της λεμφοκυτταρικής και η σύνθεση αυτής. Όμως, ο βαθμός της αποτελεσματικότητας της δράσης του ανοσολογικού συστήματος καθορίζεται και από άλλους παράγοντες μεταξύ των οποίων σημαντικός παράγοντας είναι η σύνθεση του μικροπεριβάλλοντος/ανοσοπεριβάλ-λοντος του όγκου. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν ο συσχετισμός και η συγκριτική μελέτη της πυκνότητας των TILs στο στρώμα του όγκου, της σύνθεσης αυτών, του βαθμού της έκφρασης του HER2 και της Claudin18.2 με τις διάφορες ιστοπαθολογικές παραμέτρους του αδενοκαρκινώματος του στομάχου. Η Claudin 18.2 αποτελεί πρωτεϊνικό μόριο της κυτταρικής μεμβράνης που ανήκει στην κατηγορία των μορίων στενής σύνδεσης (tight junction molecules) που σχηματίζουν παρακυτταρικά φράγματα και πόρους που καθορίζουν τη διαπερατότητα των στενών κυτταρικών συνδέσεων και αλληλεπιδρούν με το μικροπεριβάλλον του όγκου. Μελετήθηκαν αναλυτικά 87 περιστατικά αδενοκαρκινώματος του στομάχου και συγκεκριμένα οι ιστοπαθολογικές παράμετροι, όπως το βάθος διήθησης (pT), η παρουσία και ο βαθμός των λεμφαδενικών μεταστάσεων (pN), η παρουσία ή όχι απομακρυσμένης μετάστασης επιβεβαιωμένης παθολογοαντομικά (pM), η μέγιστη διάμετρος του όγκου, η παρουσία ή όχι νέκρωσης, η λεμφαγγειακή-περινευρική διήθηση, η διαφοροποίηση και ο ιστολογικός τύπος του όγκου. Επίσης μελετήθηκε η πυκνότητα των TILs και ανοσοϊστοχημικά η πυκνότητα των CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm², ο βαθμός της έκφρασης του C-erbB2(HER2) και ο βαθμός έκφρασης της Claudin18.2 και έγινε προσπάθεια συσχετισμού/συγκριτικής μελέτης των ευρημάτων αυτών, τόσο σε συσχετισμό με τις αναφερόμενες ιστοπαθολογικές παραμέτρους, όσο και μεταξύ αυτών, καθώς και συνδυαστικά συνολικά με όλες τις παραμέτρους που μελετήθηκαν. Από τη μελέτη αυτή προέκυψε ότι ο μειωμένος βαθμός λεμφοκυτταρικής διήθησης (TILs%, CD3/mm², CD8/mm² και CD20/mm²) σχετίζεται με αυξημένο βάθος διήθησης, ενώ από την περιγραφική ανάλυση των λεμφαδενικών μεταστάσεων προέκυψε σε ηπιότερο βαθμό πτώση των τιμών TILs%, CD3/mm² και CD8/mm² στα N3a και Ν3b. Επομένως ο βαθμός διήθησης των TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm² μπορεί να θεωρηθεί προγνωστικός παράγοντας, ενώ δεν παρατηρήθηκε ότι ο βαθμός έκφρασης της Claudin 18.2 αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα, πέρα από το ότι υπάρχει θετική συσχέτιση με τα TILs%, CD3/mm², CD8/mm² και CD20/mm². Η μέγιστη διάμετρος του όγκου συσχετίστηκε αρνητικά με την πυκνότητα TILs%, CD3/mm², CD8/mm², CD20/mm², αλλά και με τον βαθμό έκφρασης της Claudin 18.2. Αξιοσημείωτο εύρημα αποτελεί ότι τα HER2 θετικά αδενοκαρκινώματα εμφανίζουν μειωμένη συσχέτιση με τα CD8/mm² και σε ηπιότερο βαθμό με τα TILs%, CD3/mm² και CD20/mm², πράγμα που αποτελεί ένδειξη επιβαρυντικού προγνωστικού παράγοντα. Άλλο αξιοσημείωτο εύρημα αποτελεί ότι υπερέκφραση (IRS=12) της Claudin 18.2. παρατηρήθηκε σε σημαντικά μικρότερο ποσοστό στον διάχυτο τύπο του καρκινώματος (7,7%) έναντι του εντερικού τύπου(26%). Υπερέκφραση της Claudin 18.2 παρατηρήθηκε σε ποσοστό 20,7% των μελετηθέντων περιστατικών. Η παρουσία νέκρωσης στο καρκίνωμα εμφανίζει σημαντική θετική συσχέτιση με το βάθος διήθησης και την μέγιστη διάμετρο του όγκου και σημαντικά μειωμένη παρουσία CD20/mm² και ηπιότερη μειωμένη παρουσία των CD3/mm² και CD8/mm². Επίσης προέκυψε σημαντική θετική συσχέτιση της λεμφαγγειακής διήθησης με την μέγιστη διάμετρο του όγκου. Το φύλο δεν φαίνεται να συσχετίζεται με όλους τους μελετηθέντες παράγοντες πέραν της αναφερόμενης αυξημένης συχνότητας του αδενοκαρκινώματος του στομάχου στους άντρες. Με βάση όλα τα αναφερόμενα στην παρούσα μελέτη θα πρέπει κάθε περίπτωση αδενοκαρκινώματος του στομάχου να μελετάται με λεπτομέρεια και να γίνεται ο συσχετισμός όλων των αναφερόμενων παραγόντων, αλλά και άλλων όπως MSI, PDL-1, EBV και ενδεχομένως και άλλων που θα προκύψουν από τις συνεχιζόμενες σχετικές έρευνες, δηλαδή να γίνεται μία πολυπαραγοντική μελέτη.