Μελέτη του μηχανισμού της αιμόστασης σε σηπτικά νεογνά με τη χρήση θρομβοελαστομετρίας και κυτταρομετρίας ροής

Abstract

Neonatal sepsis is frequently accompanied by coagulopathy and thrombocytopenia attributed to the cross-link between inflammation and coagulation. However, sepsis-induced coagulopathy and platelet function in septic preterm neonates remain to be elucidated. In addition, there is no robust evidence for a causal relationship between thrombocytopenia and bleeding in preterm neonates with sepsis. This single-center prospective cohort study aimed to assess sepsis-induced coagulopathy and platelet function in preterm neonates during sepsis. We included twenty eight preterm neonates with sepsis and studied in comparison to thirty healthy counterparts. Coagulation was assessed using conventional coagulation tests (CCTs) and rotational thromboelastometry (ROTEM). Platelet function was evaluated by flow cytometry. The study was conducted at 3-time points, at first, at second to third, and at fith to seventh day of sepsis, respectively. Compared with healthy controls, neonates with Gram-positive sepsis present in ROTEM a hypercoagulable state; a higher maximum clot firmness and higher amplitudes of intrinsic rotational thromboelastometry, extrinsic rotational thromboelastometry and rotational thromboelastometry assay for fibrin formation. Conversely, CCTs exhibited hypocoagulation. Thrombocytopenia in preterm neonates with Gram-positive sepsis is not associated with an increased bleeding risk. In Gram-positive sepsis, platelets display increased glycoprotein (GP) surface receptors’ expression and reduced activation. A higher expression of platelets GP and improved degranulation capacity were recorded in patients in higher gestational age groups of above thirty two weeks of gestation. Platelet GPIb expression is age-dependent in healthy neonates. Neonates with Gram-negative sepsis compared with those of Gram-positive sepsis displayed hypocoagulable state with reduced values in the relevant ROTEM assays and similarly reduced platelet GP expression and degranulation. Thrombocytopenia in preterm neonates with Gram-negative sepsis is associated with increased bleeding risk. Conventional coagulation tests showed hypocoagulable state in all patients compared with their healthy counterparts. Neonatal Gram-positive sepsis is characterized by a progressive hypercoagulation along with increased GP expression, reduced platelet activation, and thrombocytopenia without bleeding. Platelet GP expression and degranulation capacity are age-dependent among neonates with sepsis. Platelet GP expression is age-dependent among healthy counterparts. Hypocoagulable profile, thrombocytopenia along with platelet impairment and bleeding are observed in patients with gram negative sepsis and disseminated intravascular coagulation. Conventional coagulation tests present low sensitivity in discrimination of hypercoagulability.

Η νεογνική σήψη συχνά επιπλέκεται με διαταραχές της αιμόστασης και θρομβοπενία, τα οποία αποδίδονται στην αλληλεπίδραση της φλεγμονής και του ενεργοποιημένου πηκτικού μηχανισμού. Ωστόσο, οι διαταραχές της αιμόστασης και της λειτουργικότητας των αιμοπεταλίων που επάγονται από τη σήψη σε πρόωρα νεογνά δεν έχουν επαρκώς μελετηθεί. Επιπλέον, δεν υπάρχει επαρκής τεκμηρίωση της αιτιολογικής συσχέτισης θρομβοπενίας και αιμορραγικής διάθεσης σε πρόωρα νεογνά κατά τη διάρκεια νεογνικής σήψης. Σκοπός αυτής της μονοκεντρικής, προοπτικής μελέτης παρατήρησης είναι η εκτίμηση των διαταραχών της αιμόστασης και της λειτουργικότητας των αιμοπεταλίων σε πρόωρα νεογνά κατά τη διάρκεια σήψης. Συμπεριλήφθηκαν είκοσι οκτώ πρόωρα νεογνά με σήψη και μελετήθηκαν συγκριτικά με τριάντα αντίστοιχα υγιή νεογνά. Ο πηκτικός μηχανισμός εκτιμήθηκε με συμβατικό έλεγχο πήξης και θρομβοελαστομετρία. Η λειτουργικότητα των αιμοπεταλίων εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Η μελέτη διεξήχθη σε τρείς χρονικές στιγμές, στο πρώτο, δεύτερο με τρίτο και στο πέμπτο με έβδομο εικοσιτετράωρο της σήψης αντίστοιχα. Συγκριτικά με τα υγιή νεογνά, είκοσι πέντε νεογνά με σήψη από Gram θετικά βακτήρια εμφάνισαν στη θρομβοελαστομετρία υπερπηκτικότητα με υψηλότερες τιμές μέγιστης σταθερότητας θρόμβου και εύρους θρόμβου στην έκθεση του ενδογενούς, εξωγενούς και του ινωδογόνου αντίστοιχα. Κατά τη διάρκεια της σήψης από Gram θετικά βακτήρια τα αιμοπετάλια των ασθενών παρουσιάζουν αυξημένη έκφραση των επιφανειακών γλυκοπρωτεινικών υποδοχέων και μειωμένη αποκοκκίωση. Αυξημένη έκφραση των υποδοχέων και βελτιωμένη ικανότητα αποκοκκίωσης εμφανίζουν τα αιμοπετάλια σε ασθενείς με διάρκεια κύησης μεγαλύτερη των τριάντα δύο εβδομάδων. Η θρομβοπενία στα πρόωρα νεογνά με σήψη από Gram θετικά βακτήρια δεν σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο αιμορραγίας. Συγκριτικά με τη σήψη από Gram θετικά βακτήρια, τα τρία νεογνά με σήψη από Gram αρνητικά βακτήρια εμφάνισαν υποπηκτικότητα στη θρομβοελαστομετρία στις αντίστοιχες εκθέσεις με μειωμένες τιμές των αντίστοιχων παραμέτρων και μειωμένη έκφραση υποδοχέων και μειωμένη αποκοκκίωση των αιμοπεταλίων. Η θρομβοπενία στα πρόωρα νεογνά με Gram αρνητική σήψη σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο αιμορραγίας. Στην εκτίμηση με τις συμβατικές μεθόδους όλα τα νεογνά εμφάνισαν υποπηκτικότητα συγκριτικά με τα υγιή. Στα υγιή πρόωρα νεογνά η έκφραση των GPIb υποδοχέων αυξάνει με την αύξηση της διάρκειας κύησης. Συμπερασματικά, η σήψη από Gram θετικά βακτήρια στα πρόωρα νεογνά χαρακτηρίζεται από προοδευτικά αυξανόμενη υπερπηκτικότητα, αυξανόμενη ικανότητα προσκόλλησης αλλά μειωμένη ικανότητα ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων και θρομβοπενία χωρίς αιμορραγική διάθεση. Η σήψη από Gram αρνητικά βακτήρια στα πρόωρα νεογνά χαρακτηρίζεται από υποπηκτικότητα, μειωμένη λειτουργικότητα των αιμοπεταλίων και θρομβοπενία με αυξημένο κίνδυνο αιμορραγίας. Η λειτουργικότητα των αιμοπεταλίων βελτιώνεται με την αύξηση της διάρκειας κύησης σε ασθενή και υγιή πρόωρα νεογνά. Ο συμβατικός έλεγχος πήξης παρουσιάζει χαμηλή ευαισθησία στην ανάδειξη καταστάσεων υπερπηκτικότητας.