Μοριακή ανίχνευση κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων σε ασθενείς με κακοήθειες του γαστρεντερικού συστήματος

Abstract

Introduction: The aim of this study was the development of a multiplex-PCR assay for the detection of circulating tumor cells in patients with colorectal and gastric cancer.Patients and methods: Peripheral blood samples were collected from 81 patients with colorectal cancer, 16 with gastric cancer and 38 healthy blood donors as controls. The samples were processed for RNA extraction and cDNA synthesis and subsequently, were analyzed for the expression of CK19, CK20 and EGFR with multiplex PCR.Results: The statistical analysis revealed that the combination of CK19 and CK20 could be useful for the exclusion of colorectal cancer as well as the diagnosis and exclusion of gastric cancer. Furthermore the expression of EGFR was correlated with the presence of systemic disease.Conclusion: Multiplex-PCR based detection of circulating tumor cells could serve as a useful tool for the diagnosis, and monitoring of colorectal and gastric cancer patients.

Οι κακοήθεις του γαστρεντερικού συστήματος αποτελούν κύρια αιτία θανάτου παγκοσμίως. Η διασπορά της νόσου και η ανάπτυξη μεταστάσεων επιδεινώνουν την πρόγνωση των ασθενών και δυσχεραίνουν τη δυνατότητα θεραπευτικής παρέμβασης καθιστώντας αναγκαία την ανάπτυξη μεθόδου πρώιμης ανίχνευσης μεταστάσεων. Κεντρικό ρόλο στην διασπορά της νόσου διαδραματίζουν τα κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα (circulating cancer cells, CTCs) τα οποία διαφεύγουν από την πρωτοπαθή εστία και διασπείρονται μέσω του αίματος σε απομακρυσμένους ιστούς.. Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η ανάπτυξη μίας όσο το δυνατόν ευαίσθητης και ειδικής μεθόδου απομόνωσης κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων. Στην κατεύθυνση αυτή αναπτύχθηκε μία Multiplex PCRη οποία θα ανίχνευε ταυτόχρονα την έκφραση των δεικτών επιθηλιακής προέλευσης CK19, CK20 και EGFR. Η πειραματική διαδικασία ξεκίνησε με τον προσδιορισμό των συνθηκών της αντίδρασης και διάφορες δοκιμές εύρεσης των βέλτιστων συνθηκών. Ακολούθως εφαρμόστηκε η μέθοδος σε 102 ασθενείς με κακοήθειες του γαστρεντερικού συστήματος καθώς και σε 38 φυσιολογικούς δότες. Συμπερασματικά προτείνεται η χρήση της μεθόδου στην διάγνωση και τον αποκλεισμό του καρκίνου του στομάχου, στον αποκλεισμό του καρκίνου του παχέος εντέρου και στον αποκλεισμό της παρουσίας μεταστάσεων σε ασθενείς με ήδη διαγνωσμένο καρκίνο παχέος εντέρου. Η διενέργεια επιπρόσθετων μελετών θα συμβάλει στον καθορισμό μίας καθολικά αποδεκτής μεθόδου ανίχνευσης κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων, η εφαρμογή της οποίας στην κλινική πράξη θα συμβάλλει στη βελτίωση της διάγνωσης, παρακολούθησης και θεραπευτικής αντιμετώπισης ασθενών με κακοήθειες του γαστρεντερικού συστήματος, μέσω της έγκαιρης ανίχνευσης υπολειπόμενης νόσου και της εφαρμογής εξατομικευμένης θεραπείας.