ΑΘΙΚΤΟΙ, ΑΠΟΜΟΝΩΜΕΝΟΙ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΤΕΣ ΜΕΣΟΦΥΛΛΟΥ ΚΑΙ ΚΑΤΑΦΡΑΚΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΩΣ ΣΥΣΤΗΜΑ ΜΕΛΕΤΗΣ ΤΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΤΗΣ ΚΑΡΒΟΞΥΛΑΣΗΣ ΤΟΥ ΦΩΣΦΟΕΝ...

Abstract

ΑΘΙΚΤΟΙ, ΑΠΟΜΟΝΩΜΕΝΟΙ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΤΕΣ ΜΕΣΟΦΥΛΛΟΥ (MCP) ΚΑΙ ΚΑΤΑΦΡΑΚΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ(GCP) ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΩΣ ΑΜΕΣΗ ΠΗΓΗ ΕΝΖΥΜΟΥ ΣΤΗΝ ΚΥΨΕΛΙΔΑ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ, ΓΙΑ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΤΗΣ ΚΑΡΒΟΞΥΛΑΣΗΣ ΤΟΥ ΦΩΣΦΟΕΝΟΛΠΥΡΟΣΤΑΦΥΛΙΚΟΥ (PEPCASE, EC 4.1.1.31). ΤΑ C4- ΕΙΔΗ ZEA MAYS L. ΚΑΙ AMARANTHUS PANICULATUS L. ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΤΟ C3-ΕΙΔΟΣ COMMELINA COMMUNIS L. ΑΠΕΤΕΛΕΣΑΝ ΤΑ ΠΕΙΡΑΜΑΤΟΦΥΤΑ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ. Η ΧΡΗΣΗ ΑΘΙΚΤΩΝ, ΑΠΟΜΟΝΩΜΕΝΩΝ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΤΩΝ ΕΞΑΣΦΑΛΙΖΕΙ ΤΗ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΤΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΤΗΣ PEPCASE, ΩΣ ΕΠΑΚΟΛΟΥΘΟ ΤΗΣ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗΣ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟ ΤΟΥ ΜΙΚΡΟΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝ ΚΑΙ ΤΗΣ ΑΠΟΦΥΓΗΣ ΤΩΝ ΑΛΛΟΙΩΣΕΩΝ, ΠΟΥ ΣΥΝΕΠΑΓΕΤΑΙ Η ΠΑΡΑΔΟΣΙΑΚΗ ΕΚΧΥΛΙΣΗ ΤΟΥ ΑΠΟ ΤΟΝ ΙΣΤΟ. Η ΠΑΡΑΤΗΡΟΥΜΕΝΗ ΥΣΤΕΡΗΣΗ ΚΑΤΑ ΤΗ ΜΕΤΡΗΣΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑΣ ΤΗΣ C4-PEPCASE, ΑΝΤΑΝΑΚΛΑ ΚΥΡΙΩΣ ΤΟ ΧΡΟΝΟ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΕΙΤΑΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΘΡΑΥΣΗΣ ΤΩΝ MCP, ΛΟΓΩ ΤΗΣ ΧΑΜΗΛΗΣ ΩΣΜΩΤΙΚΗΣ ΠΙΕΣΕΩΣ ΤΟΥ ΔΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ. H PEPCASE ΑΠΟ MCP ZEA MAYSL. ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΥΨΗΛΗ ΕΙΔΙΚΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑ (18 U MG-1 ΠΡΩΤΕΙΝΗΣ), ΣΥΓΚΡΙΣΙΜΗ ΜΕ ΤΙΣ ΤΙΜΕΣ ΠΟΥ ΑΝΑΦΕΡΟΝΤΑΙ ΣΤΗ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΓΙΑ ΚΑΘΟΡΙΣΜΕΝΟ ΕΝΖΥΜΟ. Η ΥΨΗΛΗ ΑΥΤΗ ΤΙΜΗ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΤΗ ΜΗ ΛΥΣΗ ΤΩΝ ΧΛΩΡΟΠΛΑΣΤΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΕΝΖΥΜΙΚΗ ΔΟΚΙΜΗ, ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΣΤΗΝ ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΩΝ ΥΠΟΛΟΙΠΩΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΤΥΠΩΝ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗΣ ΤΩΝ MCP. ΤΟ ΕΝΖΥΜΟ ΠΟΥ ΠΡΟΕΡΧΕΤΑΙ ΑΠΟ ΠΡΩΤΟΠΛΑΣΤΕΣ ΠΑΡΟΥΣΙΑΖΕΙ ΜΙΑ ΣΑΦΕΣΤΑΤΑ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΕΝΑΝΤΙ ΤΟΥ ΜΗΛΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ, ΣΕ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕ ΤΟ ΠΑΡΑΔΟΣΙΑΚΑ ΕΚΧΥΛΙΖΟΜΕΝΟ. (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ)

INTACT MESOPHYLL (MCP) AND GUARD CELL (GCP) PROTOPLASTS, ISOLATED FROM THE LEAVES OF TWO C4 (ZEA MAYS L., AMARANTHUS PANICULATUS L.) AND ONE C3 (COMMELINA COMMUNIS L.) PLANT SPECIES, WERE USED AS AN IMMEDIATE SOURCE OF ENZYME IN THEASSAY MEDIUM, FOR STUDYING PROPERTIES OF PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYLASE (EC 4.1.1.31). THE USE OF INTACT, ISOLATED PROTOPLASTS ASSURES THE STABILITY OF PEPCASE PROPERTIES, SINCE THE ENZYME IS MAINTAINED IN ITS PHYSIOLOGICAL MICROENVIRONMENT. AS A CONSEQUENCE THE FAST ACTIVITY CHANGES FOLLOWING EXTRACTIONARE AVOIDED. THE LAG OBSERVED IN THE ACTIVITY OF C4-PEPCASE IS MAINLY DUE TOTHE TIME NECESSARY FOR THE COMPLETE DISRUPTION OF MCP BY OSMOTIC SHOCK IN THE ASSAY. SINCE ONLY CYTOPLASMIC PROTEINS FROM C4-MESOPHYLL PROTOPLASTS (ZEA MAYS L.) ARE RELEASED IN THE ASSAY MEDIUM, THE APPARENT SPECIFIC ACTIVITY OF PEPCASE IS CONSIDERABLY HIGH (18 U MG-1 PROTEIN), COMPARABLE TO THAT REPORTEDIN THE LITERATURE FOR THE PURIFIED ENZYME. PEPCASE SENSITIVITY TO MALATE IS SIGNIFICANTLY GREATER IN THE CASE OF ISOLATED PROTOPLASTS THAN THE TRADITIONALLY EXTRACTED ENZYME. (ABSTRACT TRUNCATED)