Ανάλυση κυτταρικού DNA με κυτταρομετρία ροής σε δείγμα μυελού των οστών ασθενών με πολλαπλούν μυέλωμα και άλλες γαμμαπάθειες: κλινική αξιολόγηση και προγνωστική σημασία

Abstract

Multiple myeloma (MM), macroglobulinaemia Waldenstrom (MW), and m onoclonal gammapathy o f undetermined s ignificance (MGUS) a re the most representative diseases whose common finding is the production and detection of a monoclonal immunoglobulin in the serum, urine and other body fluids.The aim of this study was to detect any possible ralationships of the results of the DNA, and immunophénotype analysis carried out with FCM and of the concentration of the soluble IL-6 receptors (sIL-6R and sgpl30) with various clinical and laboratory parameters and to define which of the above parameters can be used for the diagnosis and the prognosis of patients with MM, MW, and MGUS.The DNA analysis with FCM has detected aneuploidy in the bone marrow in 37 out of 57 patients with MM and D.I. 1,07 (0,82-2,00), in 3 of 12 patients with MGUS and DI 1,00 (0,93-1,24), and in 2 out of 4 patients with MW and with DI 1,07 and 1,09.The gender (males>females), the type of light chains (κ>λ), and the severity of bone lesions (fractures, osteolyses>osteoporosis, single osteolysis) and the high number of plasma cells (>50%) had statistically significant relation with aneuploidy.Statistically significant difference was found between MM and MGUS regarding the proportion of patients with aneuploidy (p=0,011) and DI values (p=0,021).The gender (males>females), and the type of light chains (κ>λ) were significantly related to the proportion of mononuclear cells in S phase.The immunophenotypic analysis, in this study, has confirmed the great heterogeneity in the exrpession of various surface antigens in the bone marrow samples, detected with FCM which was found in our patients with different plasmacytic discrasias or even with the same disease. The proportion of CD38+ and CD56+ cells was higher in IgG than IgA MM at a statistical level of p<0,10. At the same level, the proportion of CD38+ CD56+ plasma cells was higher in MM with stage III while the proportion of CD138+ cells was found higher in MM of stage I.Patients with aneuploid MM had more CD38+ and k+ cells in their bone marrow.The concentrations of soluble IL-6 receptors (sIL-6R and sgpl30) were significantly higher in the serum of our patients than in the control group.The sIL-6R but not the sgpl30 level seems to be related to the type of monoclonal protein (IgG>IgA).The concentrations of sIL-6R and sgpl30 were not dependent on the presence or not of aneuploidy.23 out of 57 patients with MM died within the period of our study. The survival time and the duration of response to chemotherapy seem to be unrelated to our DNA analysis parameters.

Το πολλαπλούν μυέλωμα (MM), η μακροσφαιριναιμία Waldenstrom (MW), και η μονοκλωνική γαμμαπάθεια αδιευκρίνιστης σημασίας (MGUS) είναι τα πιο αντιπροσωπευτικά νοσήματα με κοινό γνώρισμα την παραγωγή και ανίχνευση παραπρωτεΐνης (Μ-πρωτεΐνη) στον ορό, ούρα και σε άλλα βιολογικά υγρά.Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η συσχέτιση των ευρημάτων της DNA ανάλυσης και της ανοσοφαινοτυπικής ανάλυσης με τη βοήθεια της κυτταρομετρίας ροής και των επιπέδων των διαλυτών υποδοχέων της IL-6 (sIL-6R, sgpl30) με διάφορα κλινικά και εργαστηριακά ευρήματα ώστε να προσδιορισθούν οι πιθανές παράμετροι που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διάγνωση και την πρόγνωση των ασθενών με MM, MW και με MGUS.Η DNA ανάλυση με κυτταρομετρία ροής έδειξε ανευπλοειδία στο μυελό των οστών σε 37 από τους 57 ασθενείς με ΜΜ και D.I. 1,07 (0,82- 2,00), σε 3 από τους 12 ασθενείς με MGUS D.I. 1,00 (0,93-1,24) και σε 2 από τους 4 με MW με D.I. 1,07 και 1,09.Παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ ΜΜ και MGUS όσον αφορά το ποσοστό ασθενών με ανευπλοειδία (ρ=0,011) και το DI(p=0,021).Το φύλο (άνδρες>γυναίκες), ο τύπος της ελαφράς αλύσου (κ>λ) και η οστική νόσος (κατάγματα/οστεολύσεις>οστεοπενία, μονήρης οστεόλυση) και ο υψηλός αριθμός των πλασματοκυττάρων (>50%) είχαν στατιστικά σημαντική σχέση με την ανίχνευση ανευπλοειδίας σε ασθενείς με ΜΜ.Το φύλο (άνδρες>γυναίκες) και ο τύπος της ελαφράς αλύσου (κ>λ) συσχετιζόταν με την τιμή του DI, σε επίπεδο σημαντικότητας ρ<0,05.Η ηλικία (>64 ετών) και ο τύπος της ελαφράς αλύσου (κ>λ) ήσαν στατιστικά σημαντικά σχετιζόμενες με το ποσοστό των μονοπύρηνων κυττάρων σε φάση σύνθεσης (S). Η ανοσοφαινοτυπική ανάλυση επιβεβαίωσε τη μεγάλη ετερογένεια των διάφορων αντιγόνων επιφάνειας (Ags) στα εξετασθέντα δείγματα μυελού με κυτταρομετρία ροής που παρατηρήθηκε μεταξύ των ασθενών μας με διαφορετική αλλά και με την ίδια νόσο.Το ποσοστό των CD38+Kai των CD56+ κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερο σε οριακό επίπεδο στα IgG σε σχέση με τα IgA MM σε επίπεδο σημαντικότητας ρ<0,10. Στο ίδιο στατιστικό επίπεδο, το ποσοστό των πλασματοκύτταρων που ήταν ταυτόχρονα CD38+ CD56+ ήταν σημαντικά μεγαλύτερο σε ΜΜ σταδίου III ενώ αντίθετα των CD38 πλασματοκύτταρων σε ΜΜ με στάδιο I.Η συχνότητα έκφρασης του CD38 Ag βρέθηκε 5 φορές υψηλότερη στα ΜΜ με ανευπλοειδία όπου υπερτερούσαν οι κ αλύσεις.Η παρούσα μελέτη επιβεβαίωσε τη στατιστικά σημαντική διαφορά στις συγκεντρώσεις των διαλυτών υποδοχέων (sIL-6R και sgpl30R) μεταξύ των ασθενών με ΜΜ και των φυσιολογικών μαρτύρων. Μεγαλύτερες τιμές είχαν καταγράφει στους ασθενείς με ΜΜ.Η συγκέντρωση του sIL-6R φαίνεται να συναρτάται σημαντικά με τον τύπο της παραπρωτεΐνης (IgG>IgA) αλλά όχι με την ανίχνευση ανευπλοειδίας.Η συγκέντρωση της sgpl30 δεν είχε καμιά στατιστική διαφορά ανάλογα με τον τύπο της παραπρωτεΐνης αλλά και με την ανίχνευση ανευπλοειδίας.Από τους 57 ασθενείς με ΜΜ κατέληξαν οι 23. Ο χρόνος επιβίωσης και η διάρκεια ανταπόκρισης στη χημειοθεραπεία φαίνεται να ήταν ανεξάρτητος των παραμέτρων της DNA ανάλυσης.