ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΕΘΟΔΟΥ ΕΝΖΥΜΟΑΝΟΣΟΧΗΜΙΚΟΥ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΟΛΙΚΗΣ ΤΡΙΙΩΔΟΘΥΡΟΝΙΝΗΣ (Τ3) ΣΕ ΟΡΟ ΚΑΙ ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕΘΟΔΩΝ ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΥ ΦΥΣΙΚΟΧΗΜΙΚΩΝ ΠΑ...

Abstract

IN THIS STUDY THE DEVELOPMENT OF A NEW COMPETITIVE HETEROGENOUS ENZYME IMMUNOASSAY FOR TOTAL TRIIODOTHYRONINE, T3, IN HUMAN SERUM IS DESCRIBED. THE ANTIOBODY WAS IMMOBILIZED ON POLYSTYRENE TUBES BY ADSORPTION. THE AMOUNT OF IMMOBILIZED ANTIBODY, EXPRESSED IN ANTIBODY BINDING SITES, AND THE AFFINITY CONSTANT WERE BOTH CALCULATED. THE ENZYME-HAPTEN CONJUGATE WAS PREPARED BY COUPLING T3 TO B-D-GALACTOSIDASE, USING N-MALEIMIDO-ME CYCLOHEXANE- HYDROXYSUCCINIMIDE ESTER, AS CROSS LINKING REAGENT. THE PROPOSED IMMUNOASSAY WAS EVALUATED BY PRECISSION AND ACCURACY STUDIES. IN ADDITION TO THIS WORK, THREE METHODS FOR THE DETERMINATION OF SPECIFIC ACTIVITY IN RADIOACTIVE TRACERS WERE COMPARED AND APPLIED ON A COMPETITIVE RADIOIMMUNOASSAY FOR TOTAL T3. A GRAPHICAL METHOD, ORIGINALLY DESCRIBEDFOR CALCULATION OF SPECIFIC RADIOACTIVITY, WAS MODIFIED AND APPLIED ON ENZYME CONJUGATE. THE MOLES OF T3 CONJUGATED PER MOLE ENZYME WERE THUS CALCULATED.

ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΕΡΓΑΣΙΑ ΑΥΤΗ, ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΕΝΖΥΜΙΚΟΣ ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΟΛΙΚΗΣ ΤΡΙΙΩΔΟΘΥΡΟΝΙΝΗΣ, Τ3, ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΟΡΟ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΤΑ ΦΥΣΙΚΟΧΗΜΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΩΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΟΥΜΕΝΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΜΕ ΓΡΑΦΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟ. ΤΟ ΑΝΤΙΣΩΜΑ ΑΚΙΝΗΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΣΕ ΣΩΛΗΝΕΣ ΠΟΛΥΣΤΥΡΕΝΙΟΥ ΜΕ ΠΡΟΣΡΟΦΗΣΗ. ΜΕΤΡΗΘΗΚΕ Η ΣΤΑΘΕΡΑ ΣΥΓΓΕΝΕΙΑΣ ΤΟΥ ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΤΟ ΠΟΣΟ ΤΟΥ ΠΡΟΣΡΟΦΗΜΕΝΟΥ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΟΣ, ΕΚΦΡΑΣΜΕΝΟ ΣΕ ΘΕΣΕΙΣ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣΑΝΤΙΓΟΝΟΥ. Ο ΕΝΖΥΜΙΚΟΣ ΙΧΝΗΘΕΤΗΣ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΤΗΚΕ ΜΕ ΟΜΟΙΟΚΟΛΙΚΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΗΣ Τ3 ΠΡΟΣ Β-D-ΓΑΛΑΚΤΟΣΙΔΑΣΗ, ΜΕΣΩ Ν- ΜΗΛΕΙΝΙΜΙΔΟ ΜΕΘΥΛΟΚΥΚΛΟΕΞΑΝΙΚΟΥ ΗΛΕΚΤΡΙΜΙΔΕΣΤΕΡΑ ΜΕ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΜΕΝΟ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ. Ο ΕΝΖΥΜΙΚΟΣ ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΠΟΥ ΑΝΑΠΤΥΧΘΗΚΕ ΕΛΕΓΧΘΗΚΕ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΗΝ ΕΠΑΝΑΛΗΠΤΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΤΟΥ. ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΕΠΙΣΗΣ ΤΡΕΙΣ ΓΝΩΣΤΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΤΗΣ ΕΙΔΙΚΗΣ ΡΑΔΙΕΝΕΡΓΕΙΑΣ ΚΑΙ ΕΦΑΡΜΟΣΤΗΚΑΝ ΣΕ ΡΑΔΙΟ-ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΟΛΙΚΗΣ Τ3, ΤΟΥ ΕΜΠΟΡΙΟΥ. ΜΙΑ ΓΡΑΦΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ, ΠΟΥ ΕΙΧΕ ΑΡΧΙΚΑ ΠΡΟΤΑΘΕΙ ΓΙΑ ΤΟΝ ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟ ΤΗΣ ΕΙΔΙΚΗΣ ΡΑΔΙΕΝΕΡΓΕΙΑΣ, ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΩΣΤΕ ΝΑ ΕΦΑΡΜΟΣΤΕΙ ΣΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΙΚΟΥ ΙΧΝΗΘΕΤΗ. ΜΕΤΡΗΘΗΚΕ ΕΤΣΙ Ο ΑΡΙΘΜΟΣ ΤΩΝ MOLES Τ3 ΠΟΥ ΕΙΝΑΙ ΟΜΟΙΟΚΟΛΙΚΑ ΣΥΝΔΕΔΕΜΕΝΑ ΑΝΑ MOLE ΕΝΖΥΜΟΥ.