Μελέτη επίδρασης ακτινοβολίας σε κύτταρα όγκου του δέρματος πειραματοζώων με αναοσοϊστοχημεία φωτονικού και ηλεκτρονικού μικροσκοπίου

Abstract

We studied the activity of carcinogen compounds in skin cells and the effect of radiation on the generated tumor. The biological material of our experiment was seven weeks old rats from the race Wistar, weighting aproximately 150 gr. The nutritional and the environmental conditions were stable during the experiments. We used 26 animals, 6 of them were used as control. The 9,10 Dimethiyl - 1,2, Benzanthracene generated the skin tumor to the rest of the animals that afterwards were subjected to radiation. The results are related to nucleus of the skin cells till the coloring used is related to the stereomorphology of the chromatin. Important role in the appreciation of the results has the phosphodugsting acid molecule that has a great size and it is inhibited from the concentrated chromatin. The stereochemical inhibition is due to fact that the basic charges are in the internal site of the concentrated chromatin and they can bind to the coloring. The nucleus don’t give a reaction when the basic charges are less, in the contrary the reaction took play when the basic charges are increased. Our results are related to the nucleus function since we observed that the cells are less active and the chromatin is concentrated. The concentration of the chromatin concludes the decrease of the cell functionalism. The above results are in accordance with the results from the silver nitrate method since it expresses the free basic charges of the histones. The study of the biopsies reveals that the free charges of the histones are increased when they are affected from the carcinogen as we observed in the electron microscopy and the histograms. Changes in the cells functionalism are observed using the immunolocalization method, for studding the biopsies. The 67 PK protein, present in the surface of the cells is decreased since in the radiated cells the fluorescence is observed as grains There is no signal (fluorescence) in those cells that the protein is absent, improving the precision of the method. In addition in our study we observed the differential functionalism of the nucleus after the effect of the radiation and if the carcinogen has already act. The differential functionalism is observed in cellular and molecular level since the radiation has affected the genome and the nucleoproteins.

Η μελέτη δράσης καρκινογόνου σε κύτταρα του δέρματος και η επίδραση της ακτινοβολίας στον δημιουργηθέντα όγκο έγινε σε πειραματόζωα επίμυες αρσενικούς της φυλής Wistar, ηλικίας επτά εβδομάδων και βάρους 150 gr περίπου. Οι συνθήκες περιβάλλοντος και διατροφής των πειραματόζωων παρέμειναν σταθερές. Το σύνολο των πειραματόζωων ήταν είκοσι έξι (26), τα οποία χρησιμοποιήθηκαν σε δύο βασικές ομάδες. Η μία ομάδα από τρία πειραματόζωα χρησιμοποιήθηκε ως ομάδα ελέγχου, ενώ τα είκοσι υπόλοιπα χρησιμοποιήσαμε για τα πειράματά μας που είναι δημιουργία επιδερμικού καρκινώματος με το 9,10 Dimethiyl - 1,2, Benzanthracene και την επίδραση ακτινοβολίας. Τα αποτελέσματα που πήραμε μας εκφράζουν τα κύτταρα του δέρματος πειραματόζωων σε επίπεδο πυρήνων αφού η χρωστική μας σχετίζεται με το πλεκτονομικό σύμπλοκο χρωματίνης. Σημαντικό ρόλο στην αξιολόγηση παίζει το μόριο της φωσφοροβολφραμικού οξέος, το οποίο είναι σχετικά μεγάλων διαστάσεων και υφίσταται στερεοχημική παρεμπόδιση από τη συμπυκνωμένη χρωματίνη. Η στερεοχημική παρεμπόδιση οφείλεται κυρίως στο γεγονός ότι τα βασικά φορτία βρίσκονται στο εσωτερικό του συμπλόκου της συμπυκνωμένης χρωματίνης και δύναται να δεσμεύσουν τη χρωστική. Οι πυρήνες που δεν έχουν αντιδράσει με τη χρωστική σημαίνει ότι τα ελεύθερα βασικά φορτία της χρωματίνης είναι ελάχιστα, ενώ σε αυτά που έχει θετική αντίδραση τα ελεύθερα βασικά φορτία είναι αυξημένα. Τα αποτελέσματα της μελέτης μας σχετίζονται με τη λειτουργία του πυρήνα των κυττάρων του δέρματος των οποίων η λειτουργικότητα φαίνεται ότι έχει μειωθεί έντονα, αφού μορφολογικά δείχνουν ότι η χρωματίνη έχει συμπυκνωθεί. Η συμπύκνωση της χρωματίνης σημαίνει ότι η λειτουργικότητα των κυττάρων έχει μειωθεί. Παρόμοια αποτελέσματα συμπεραίνονται και από τη μέθοδο νιτρικού αργύρου, αφού αυτή η μέθοδος εκφράζει τα ελεύθερα βασικά φορτία των ιστονών. Η μελέτη των βιοψιών δείχνει ότι τα ελεύθερα φορτία των ιστονών αυξάνονται αισθητά στις βιοψίες που έχει επιδράσει το καρκινογόνο όπως φαίνεται στις αντίστοιχες ηλεκτρονιογραφίες και όπως εκφράζονται από το ιστόγραμμα. Η αλλαγή στη λειτουργική διαδικασία των κυττάρων εκφράζεται και μέσω του ανοσοφθορισμού που μελετήσαμε τις βιοψίες όλων των πειραματόζωων. Η αλλαγή της λειτουργικότητας των κυττάρων εκφράζεται από το γεγονός ότι η πρωτεΐνη 67 ΡΚ που βρίσκεται στην επιφάνεια των κυττάρων. Η ποσότητα της πρωτεΐνης αυτής φαίνεται να μειώνεται αισθητά και ίσως αλλάζει η στερεοδιάταξή της, αφού στα κύτταρα των βιοψιών μετά από ακτινοβόληση εμφανίζεται ο φθορισμός υπό μορφή κόκκων. Η μεθοδολογία του φθορισμού όπως είναι γνωστό είναι ακριβής και τούτο φαίνεται ότι η πρωτεΐνη που μελετάμε δεν βρίσκεται σε όλα τα κύτταρα και αυτά δεν εμφανίζουν φθορισμό όπως εκφράζονται από τις αντίστοιχες φωτογραφίες. Τέλος η μελέτη μας εκφράζει τη διαφορική λειτουργικότητα των πυρήνων μετά την επίδραση της ακτινοβολίας, αφού βέβαια έχει επιδράσει το καρκινογόνο. Η διαφορική λειτουργικότητα των πυρήνων και πυρηνίσκων εκφράζετε σε κυτταρικό και μοριακό επίπεδο αφού η ακτινοβολία έχει επιδράσει στο σύμπλεγμα γενετικού υλικού και νουκλεοπρωτεϊνών.