Μελέτη γλυκοζαμινογλυκανών και πρωτεογλυκανών σε λευχαιμικά κύτταρα

Abstract

THIS THESIS DEALS WITH THE STUDY OF THE PROTEOGLYCANS (PGS) AND THE GLYCOSAMINOGLYCANS (GAGS)SYNTHESIZED BY LEUKEMIC LYMPHOCYTES AND MONOSYTES AND THE ACTIVITY OF MITOGENS ON SYNTHESIS AND DISTRIBUTION OF GAGS.BESIDES, THE EFFECTS OFGAGS,ALONE OR IN COMBINATION WITH MITOGENS,ON CELL PROLIFERATION WAS ALSO STUDIED.THREE HUMAN LEUKEMIC CELL LINES WERE CHOSES: JURKAT (T-CELL LEUKEMIA),DAUDI(B-CELL LEUKEMIA)AND THP-1(ACUTE MONOCYTIC LEUKEMIA).AT THE BEGINNING OF THIS STUDY,THE EXPRESSION OF DIFFERENT PGS OF CELL SURFACE AND EXTRACELLULAR MATRIX WAS STUDIED USING RT-PCR.IT WAS FOUND THAT ALL THREE CELL LINES SYNTHESIZE MRNA FOR SYNDECAN-1,-2,AND -4, GLYPICAN,CD44,VERSICAN-0 AND VERSICAL-1,WHILE DAUDI SYNTHESIZE MRNA FOR FIBROMODULIN,AND THP-1 FOR PERLECAN AND THROMBOMODULIN. PGS FROM CELL MEMBRANE AND CULTURE MEDIUM WERE ISOLATED BY ANION-EXCHANGE CHROMATOGRAPHY AND IDENTIFIED BY WESTERN BLOTTING.IT WAS FOUND THAT JURKAT AND THP-1 BEAR SYNDECAN-1 ON THEIR CELL SURFACE,AND JURKAT AND DAUDI BEAR SYNDECAN-4.BUT WITH DIFFERENT SULPHATION AND/OR GLYCOSYLATION PATTERNS AMONG CELL LINES.THP-1 SECRETE THROMBOMODULIN AND PERLECAN TO THE CULTURE MEDIUM, WHILE DAUDI SECRETE A KERATAN SULFATE PG. BY STUDYING THE SYNTHESIS AND DISTRIBUTION OF GAGS IN THE LEUKEMIC CELL LINES, IT WAS FOUND THAT THE CELLS DO NOTPRODUCE HYALURONAN.THEY SYNTHESIZE MAINLY CHONDROITIN SULFATE (CS)AND CONSIDERABLE AMOUNT OF HEPARAN (HS).IT WAS ALSO FOUND THAT MITOGENS AFFECT BOTH SYNTHESIS AND DISTRIBUTION OF GAGS, INDEPENDENTLY OF THEIR EFFECT ON CELL PROLIFERATION.

Η ΠΑΡΟΥΣΑ ΔΙΑΤΡΙΒΗ ΕΙΧΕ ΣΤΟΧΟ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΠΡΩΤΕΟΓΛΥΚΑΝΩΝ (PGS)ΚΑΙ ΓΛΥΚΟΖΑΜΙΝΟΓΛΥΚΑΝΩΝ (GAGS)ΛΕΥΧΑΙΜΙΚΩΝ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΩΝ ΚΑΙ ΜΟΝΟΚΥΤΤΑΡΩΝ ΚΑΙ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΜΙΤΟΓΟΝΩΝ ΣΤΗ ΣΥΝΘΕΣΗ ΚΑΙ ΚΑΤΑΝΟΜΗ ΤΩΝ GAGS ΟΠΩΣ ΕΠΙΣΗΣ ΤΗ ΜΕΛΕΤΗ ΔΡΑΣΗΣ ΕΞΩΓΕΝΩΝ GAGS ΣΤΟΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟ,ΜΟΝΩΝ ΤΟΥΣ,Η ΣΕ ΣΥΝΔΥΑΣΜΟ ΜΕ ΜΙΤΟΓΟΝΑ.ΕΠΙΛΕΧΘΗΚΑΝ ΤΡΕΙΣ ΛΕΥΧΑΙΜΙΚΕΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΕΣ ΣΕΙΡΕΣ :JURKAT (ΟΞΕΙΑ Τ-ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ),DAUDI (Β-ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ)ΚΑΙ THP-1 (ΟΞΕΙΑ ΜΟΝΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑ).ΑΡΧΙΚΑ ΜΕ RT-PCR ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΕ Η ΕΜΦΑΣΗ ΠΡΩΤΕΟΓΛΥΚΑΝΩΝ ΣΕ ΕΠΙΠΕΔΟ MRNA,ΚΑΙ ΒΡΕΘΗΚΕ ΟΤΙ ΚΑΙ ΟΙ ΤΡΕΙΣ ΚΥΤΑΡΙΚΕΣ ΣΕΙΡΕΣ ΕΧΟΥΝ ΤΗ ΔΥΝΑΤΟΤΗΤΑ ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΣΥΝΔΕΙΝΗΣ-1,-2,-4,ΓΛΥΠΙΚΑΝΗΣ,CD44,ΒΕΡΣΙΚΑΝΗΣ-0 ΚΑΙ ΒΕΡΣΙΚΑΝΗΣ-1(ΤΥΠΟΣΕΝΑΛΛΑΚΤΙΚΟΥ ΜΑΤΙΣΜΑΤΟΣ ΤΗΣ ΒΕΡΣΙΚΑΝΗΣ). ΤΑ DAUDI ΕΧΟΥΝ ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΤΗ ΔΥΝΑΤΟΤΗΤΑ ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΙΝΟΜΟΝΤΟΥΛΙΝΗΣ,ΕΝΩ ΤΑ THP-1 ΜΠΟΡΕΙ ΝΑ ΣΥΝΘΕΤΟΥΝ ΠΕΡΛΕΚΑΝΗ ΚΑΙ ΘΡΟΜΒΟΜΟΝΤΟΥΛΙΝΗ. ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΘΗΚΕ ΜΕ WESTERN BLOTTING Η ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΣΥΝΔΕΙΝΗΣ -1,ΔΥΟΤΥΠΩΝ ΣΥΝΔΕΙΝΗΣ -4 ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΗΣ ΓΛΥΚΟΖΙΛΙΩΣΗΣ,Η ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗΣ ΘΕΙΩΣΗΣ,ΘΡΟΜΒΟΜΟΝΤΟΥΛΙΝΗΣ, ΒΕΡΣΙΚΑΝΗΣ-0,ΒΕΡΣΙΚΑΝΗΣ-1 ΜΙΑΣ PG ΘΕΙΙΚΗΣ ΚΕΡΑΤΑΝΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΛΕΚΑΝΗΣΑΝΑΛΟΓΑ ΜΕ ΤΗΝ ΚΑΘΕ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΣΕΙΡΑ.ΜΕ ΧΡΗΣΗ ΕΝΖΥΜΙΚΩΝ ΚΑΤΕΡΓΑΣΙΩΝ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ HPLC ΒΡΕΘΗΚΕ ΠΩΣ ΚΑΜΙΑ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΣΕΙΡΑ ΔΕ ΣΥΝΘΕΤΕΙ HA.ΣΥΝΘΕΤΟΥΝ ΚΥΡΙΩΣ CSΚΑΙ ΣΕ ΜΙΚΡΟΤΕΡΟ ΠΟΣΟΣΤΟ HS.ΑΚΟΛΟΥΘΩΣ,ΕΛΕΓΘΗΚΕ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΕΞΩΓΕΝΩΝ GAGS ΣΤΟΝ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ,ΟΠΩΣ ΕΠΙΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΡΑΣΗ ΓΛΥΚΟΖΑΜΙΝΟΓΛΥΚΑΝΩΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΜΙΤΟΓΟΤΩΝ ΣΤΟΝ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ,ΜΕ ΣΚΟΠΟ ΝΑ ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΕΙ ΤΟ ΚΑΤΑ ΠΟΣΟ ΣΥΜΜΕΤΕΧΟΥΝ ΟΙ GAGS ΣΤΟΥΣ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΥΣ ΔΙΕΓΕΡΣΗΣ.