Καθορισμός αντιγονικών επιτόπων με σύνθεση πεπτιδικών αναλόγων για τη μελέτη της αυτοάνοσης απόκρισης στα αυτοάνοσα νοσήματα

Abstract

AUTOIMMUNE RHEUMATIC DISEASES ARE OFTEN ASSOCIATED WITH AUTO ANTIBODIES AGAINST RIBONUCLEOPROTEIN COMPLEX RO/RNP. IN ORDER TO EXAMINE THE EXACT LOCATION OF THEIR EPITOPES, WE SYNTHESITED PEPTIDE ANALOGUES CORRESPONDING TO THE AMINO TERMINAL EPITOPE OF CALRETICULIN, TO VSV HOMOLOGOUS REGION OF RO 60KD PROTEIN AND USING LARGE OVERLAPPING SYNTHETIC PEPTIDES, AN EXTENSIVE EPITOPE MAPPING OF THE RO 60KD AUTOANTIGEN WAS PERFORMED. THE SYNTHETIC PEPTIDES OF CALRETICULIN REACTED WITH SERA FROM PATIENTS WITH SLE, SS, RA AND MCTD SUGGESTING THAT THEY ARE EPITOPES WITHOUT ANY DISEASE SPECIFICITY. THE EYRKKMDI VSVVIRUS RELATED PEPTIDE OF RO 60KD AUTOANTIGEN REACTED ONLY WITH A MINORITY OF ANTI-RO/SSA 60KD AUTOANTIBODIES, WHILE THE EPITOPE MAPPING OF THIS AUTOANTIGENREVEALED TWO MAIN DESEASE SPECIFIC EPITOPES LOCATED IN SEQUENCES 175-184 AND 216-232 OF RO/60KD. THE EPITOPE 175-184 POSSESSED SEQUENCE SIMILARITY WITHTHE ASSOCIATED WITH THE ANTI-RO /SSA RESPONCE HLA DR3 AND DRW3. SYNTHETIC HOMOLOGOUES PEPTIDES OF B-CHAIN OF HLA-DR WERE PREPAPED. THESE PEPTIDES WERE FOUND TO POSSESS COMMON MOLECULAR, STRUCTURAL AND IMMUNOLOGICAL PROPERTIES WITH THE EPITOPES OF RO /60KD, SUGGESTING CROSS-REACTION OF THE AUTOANTIBODIES.

ΣΤΙΣ ΑΥΤΟΑΝΟΣΕΣ ΡΕΥΜΑΤΙΚΕΣ ΠΑΘΗΣΕΙΣ ΤΑ ΑΥΤΟΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ ΣΤΟΧΕΥΟΥΝ ΤΟ ΡΙΒΟΝΟΥΚΛΕ- ΟΠΡΩΤΕ~ΝΙΚΟ ΣΥΜΠΛΟΚΟ RO/RNP ΚΑΙ ΕΙΔΙΚΟΤΕΡΑ ΤΑ ΠΡΩΤΕ~ΝΙΚΑ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ ΤΟΥ RO/SSA 60KD, RO/SSA 52KD, LA/SSB ΚΑΙ ΚΑΛΡΕΤΙΚΟΥΛΙΝΗ. ΜΕ ΣΚΟΠΟ ΝΑ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΟΥΜΕ ΤΗΝ ΑΚΡΙΒΗ ΕΝΤΟΠΙΣΗ ΤΩΝ ΕΠΙΤΟΠΩΝ ΤΩΝ ΑΥΤΟΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΑΥΤΩΝ ΣΥΝΕΘΕΣΑΜΕ ΠΕΠΤΙΔΙΚΑ ΑΝΑΛΟΓΑ ΤΟΥ ΑΜΙΝΟΤΕΛΙΚΟΥ ΕΠΙΤΟΠΟΥ ΤΗΣ ΚΑΛΡΕΤΙΚΟΥΛΙΝΗΣ, ΤΗΣ ΟΜΟΛΟΓΗΣ ΜΕΤΟΝ VSV ΙΟ ΠΕΡΙΟΧΗΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕ~ΝΗΣ RO 60KD ΚΑΙ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΣΑΜΕ ΛΕΠΤΟΜΕΡΗ ΑΝΤΙΓΟΝΙΚΗ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΤΩΝ ΕΠΙΤΟΠΩΝ ΤΟΥ ΑΥΤΟΑΝΤΙΓΟΝΟΥ RO 60KD ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΜΕΤΑΛΛΩΝ ΑΛΛΗΛΟΕΠΙΚΑΛΥΠΤΟΜΕΝΩΝ ΣΥΝΘΕΤΙΚΩΝ ΠΕΠΤΙΔΙΩΝ. ΤΑ ΣΥΝΘΕΤΙΚΑ ΠΕΠΤΙΔΙΑ ΤΗΣ ΚΑΛΡΕΤΙΚΟΥΛΙΝΗΣ ΑΝΤΕΔΡΑΣΑΝ ΜΕ ΟΡΟΥΣ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΣΕΛ, ΣΣ, ΡΑ ΚΑΙ ΜΝΣΙ ΥΠΟΔΗΛΩΝΟΝΤΑΣ ΟΤΙ ΕΙΝΑΙ ΕΠΙΤΟΠΟΙ ΧΩΡΙΣ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΝΟΣΟΥ. ΤΟ ΣΧΕΤΙΖΟΜΕΝΟ ΜΕ ΤΟΝ ΙΟ VSV ΠΕΠΤΙΔΙΟ ΤΟΥ RO/SSA 60KD ΑΝΤΕΔΡΑΣΕ ΜΟΝΟ ΜΕ ΜΙΑ ΜΕΙΟΨΗΦΙΑ ΤΩΝ ΑΝΤ- RO/SSA 60KD ΑΥΤΟΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ, ΕΝΩ Η ΑΝΤΙΓΟΝΙΚΗ ΧΑΡΤΟΓΡΑΦΗΣΗ ΤΟΥ ΙΔΙΟΥ ΑΥΤΟΑΝΤΙ- ΓΟΝΟΥ ΑΠΟΚΑΛΥΨΕ ΤΟΥΣ ΔΥΟ ΚΥΡΙΟΥΣ ΝΟΣΟΕΙΔΙΚΟΥΣ ΕΠΙΤΟΠΟΥΣ ΤΟΥ RO/60KD ΣΤΙΣ ΑΛΛΗ- ΛΟΥΧΙΕΣ 175-184 ΚΑΙ 216-232. Ο ΕΠΙΤΟΠΟΣ 175-184 ΒΡΕΘΗΚΕ ΝΑ ΚΑΤΕΧΕΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΗΟΜΟΛΟΓΙΑ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΜΕ ΤΑ ΣΧΕΤΙΖΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΗΝ ΑΝΤΙ-RO/SSA 60KD ΑΠΟΚΡΙΣΗ HLADR3 ΚΑΙ DRW53. ΣΥΝΕΤΕΘΗΚΑΝ ΤΑ ΟΜΟΛΟΓΑ ΠΕΠΤΙΔΙΑ ΤΗΣ Β-ΑΛΥΣΙΔΑΣ ΤΩΝ HLA-DR ΤΑΟΠΟΙΑ ΕΜΦΑΝΙΣΑΝ ΚΟΙΝΕΣ ΜΟΡΙΑΚΕΣ, ΔΟΜΙΚΕΣ ΚΑΙ ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΜΕ ΤΟΥΣΕΠΙΤΟΠΟΥΣ ΤΟΥ RO/60KD ΥΠΟΔΕΙΚΝΥΟΝΤΑΣ ΔΙΑΣΤΑΥΡΟΥΜΕΝΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΑΝΤΙΣΩ- ΜΑΤΩΝ.