ΜΟΡΙΑΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΩΝ ΓΟΝΙΔΙΩΝ TRAPΒ ΚΑΙ LN10 ΠΟΥ ΕΚΦΡΑΖΟΝΤΑΙ ΣΤΗΝ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑ ΤΗΣ ΟΡΝΙΘΑΣ.

Abstract

TO ΥΠΟ ΜΕΛΕΤΗ CDNA LN10 ΕΙΧΕ ΑΠΟΜΟΝΩΘΕΙ ΑΠΟ ΜΙΑ CDNA ΒΙΒΛΙΟΘΗΚΗ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑΣ ΟΡΝΙΘΑΣ,ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΗ ΤΟΥ CDNA ΑΝΙΧΝΕΥΤΗ P12-13 - ΜΟΡΙΟ ΣΧΕΤΙΖΟΜΕΝΟ ΜΕ ΤΗΝ ΓΛΥΚΟΠΡΩΤΕIΝΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΣ ΣΥΝΑΦΕΙΑΣ ΑΝΟΣΟΣΦΑΙΡΙΝΙΚΟΥ ΤΥΠΟΥ,NILE.ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΤΟΣΟ IN VITRO ΟΣΟ ΚΑΙ IN VIVO ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΑΠΟ ΑΝΑΣΥΝΔΙΑΣΜΕΝΑ ΠΛΑΣΜΙΔΙΑ ΟΣΟ ΚΑΙ ΕΚ ΝΕΟΥ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΤΗΣ ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗΣ ΤΟΥ ΑΛΛΗΛΟΥΧΙΑΣ ΑΠΟΚΑΛΥΦΘΗΚΕ ΠΩΣ ΤΟ CDNA LN10 ΕΙΝΑΙ ΕΝΑ ΧΙΜΑΙΡΙΚΟ ΜΟΡΙΟ.ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΔΥΟ ΕΠΙΜΕΡΟΥΣ CDNAS ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΕΧΟΥΝ ΣΥΝΤΗΧΘΕΙ ΜΕ ΤΑ 5'ΑΚΡΑ ΤΟΥΣ,ΤΩΝ ΟΠΟΙΩΝ ΕΧΟΥΝ ΑΠΟΚΟΠΕΙ (ΚΑΙ ΑΡΑ ΛΕΙΠΟΥΝ ΣΤΟ ΧΙΜΑΙΡΙΚΟ ΜΟΡΙΟ) ΟΙ 5' ΜΗ ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΣΕΣ ΚΑΙ ΜΕΡΟΣ ΤΩΝ 5'ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΟΥΣΩΝ ΠΕΡΙΟΧΩΝ ΤΟΥΣ. ΤΟ ΕΝΑ ΕΙΝΑΙ ΤΟ TRAPΒ ΜΟΡΙΟ ΤΗΣ ΟΡΝΙΘΑΣ, ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΑΠΟΤΕΛΕΙ ΥΠΟΜΟΝΑΔΑ ΤΟΥ ΠΡΩΤΕIΝΙΚΟΥ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑΤΟΣ TRAP, ΠΟΥ ΒΡΙΣΚΕΤΑΙ ΣΤΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ ΤΟΥ ΕΝΔΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΟΥ ΔΙΚΤΥΟΥ (Ε.Δ) ΚΑΙ ΣΥΜΜΕΤΕΧΕΙ ΣΤΗ ΜΕΤΑΤΟΠΙΣΗ ΤΩΝ ΝΕΟΣΥΝΤΙΘΕΜΕΝΩΝ ΠΡΩΤΕIΝΩΝ ΣΤΟΝ ΑΓΩΓΟ ΤΟΥ Ε.Δ. ΠΕΙΡΑΜΑΤΑ ΣΤΟ ΕΠΙΠΕΔΟ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑΤΟΣ ΕΔΕΙΞΑΝ ΠΩΣ ΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ TRAPΒ ΠΙΘΑΝΟΤΑΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΕΝΑ ΕΞΟΝΙΟΤΟ ΟΠΟΙΟ ΕΙΤΕ ΕΠΑΝΑΛΑΜΒΑΝΕΤΑΙ ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΕΙΤΕ ΚΑΠΟΙΟ ΤΜΗΜΑ ΤΟΥ ΕΧΕΙ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑΤΟΣ. ΤΟ ΑΛΛΟ ΜΟΡΙΟ ΤΟ ΟΝΟΜΑΣΑΜΕ CHP12-13 ΛΟΓΩ ΤΗΣ ΥΨΗΛΗΣ ΝΟΥΚΛΕΟΤΙΔΙΚΗΣ ΤΟΥ ΟΜΟΛΟΓΙΑΣ ΜΕ ΤΟΝ ΑΝΙΧΝΕΥΤΗ Ρ12-13 ΚΑΙ ΑΠΟΤΕΛΕΙΝΕΟ ΜΟΡΙΟ ΠΟΥ ΔΕΝ ΕΧΕΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΟΜΟΛΟΓΙΑ ΜΕ ΚΑΝΕΝΑ ΓΝΩΣΤΟ ΜΟΡΙΟ,ΚΑΤΑΧΩΡΙΜΕΝΟ ΣΤΙΣ ΓΟΝΙΔΙΑΚΕΣ ΤΡΑΠΕΖΕΣ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ. Η ΣΥΝΑΓΟΜΕΝΗ ΔΕΥΤΕΡΟΓΕΝΗΣ ΔΟΜΗ ΤΗΣ ΠΡΩΤΕIΝΗΣ CHP12-13 ΑΠΟΤΕΛΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΕΝΑΛΛΑΓΕΣ ΣΠΕΙΡΑΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΕΛΙΚΩΝ, ΕΝΩ ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΟ CHP12-13 ΑΠΟΚΑΛΥΦΘΗΚΕ Η ΥΠΑΡΞΗ ΤΟΥΛΑΧΙΣΤΟΝ ΔΥΟ ΙΝΤΡΟΝΙΩΝ ΜΕΓΕΘΩΝ 1,23KB ΚΑΙ 0,73KB. (ΤΕΛΟΣ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ).

ΤHE STUDIED LN10 CDNA HAS BEEN ISOLATED FROM A CHICK CEREBELLUM CDNA LIBRARY BY THE USE OF THE CDNA PROBE P12-13 - MOLECULE RELATED TO NILE GLYCOPROTEIN, ANIMMUNOGLOBULIN FAMILY CELL ADHESION MOLECULE.ΒOTH IT'S IN VITRO AND IN VIVO EXPRESSION BY RECOMBINANT PLASMIDS,AS WELL AS IT'S NEW NUCLEOTIDE SEQUENCINGSHOWED THAT LN10 CDNA IS A CHIMAERIC MOLECULE.IT CONSISTS OF TWO CDNAS WHICHARE FUSED AT THEIR 5' ENDS WHEREAS THEIR 5'UNTRANSLATED AND PART OF THEIR 5' CODING REGIONS ARE CUT OFF, MISSING IN THE CHIMAERIC CDNA. ONE OF THE CDNASIS THE CHICK TRAPΒ, CODING FOR A SUBUNIT OF THE TRAP PROTEIN COMPLEX, LOCATED ON THE ENDOPLASMIC RETICULUM (E.R) MEMBRANE, PARTICIPATING IN NASCENT POLYPEPTIDE TRANSLOCATION INTO THE E.R LUMEN. EXPERIMENTS ON THE GENOMIC LEVEL SHOWED THAT MOST PROBABLY TRAPΒ GENE CONSISTS OF ONE EXON, EITHER REPEATED IN THE GENOME OR PART OF IT SHARES HOMOLOGY WITH SOME GENOMIC REGIONS. THE OTHER CDNA WAS NAMED CHP12-13 BECAUSE OF THE HIGH HOMOLOGY SHARED WITH THE CDNA PROBE P12-13. CHP12-13 IS A NEW MOLECULE, SINCE WHEN COMPARED TO ALL THE KNOWN SEQUENCES STORED IN GENE DATA BASES,NO SIGNIFICANT HOMOLOGY WAS FOUND. THE PREDICTED CHP12-13 PROTEIN SECONDARY STRUCTURE SHOWED ALTERNATING COILS AND HELICES.FINALLY, EXPERIMENTS ON THE GENOMIC LEVEL SHOWED THAT CHP12-13 GENE INCLUDES AT LEAST TWO INTONS,1.23KB AND 0.73KB IN SIZE.(ABSTR. END).