ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΤΩΝ ΘΕΣΕΩΝ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ L-ΑΣΠΑΡΤΙΚΟΥ ΚΑΙ ΚΑΙΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΕΓΚΕΦΑΛΟΥ ΠΤΗΝΩΝ. "ΣΥΜΒΟΛΗ ΣΤΗΝ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΘΕΣΕΩΝ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ"

Abstract

THE BINDING KINETICS, PHARMACOLOGICAL PROPERTIES AND REGIONAL ONTOGENY OF L-GLUTAMATE, L-ASPARTATE AND KAINATE BINDING SITES HAVE BEEN STUDIED IN MEMBRANE PREPARATIONS OF CHICK BRAIN. ONE BINDING COMPONENT WAS FOUND FOR L-[3H]GLUTAMATE AND L-[3H] ASPARTATE WITH A KD VALUE OF 176 NM AND 204 RESPECTIVELY. FOR KAINIC ACID TWO BINDING COMPONENTS WERE FOUND IN THE HEMISPHERES, OPTIC LOBES AND BRAIN STEM, ONE WITH HIGH AFFINITY AND A KD VALUE OF 12.5 NM AND ONE WITH LOW AFFINITY AND A KD VALUE OF 260 NM. IN CEREBELLUM ONLY ONE BINDING SITE WAS DETECTED FOR [3H]KAINIC ACID WITH A KD VALUE OF 144 NM. L-GLUTAMATE, L-ASPARTATE, QUISQUALATE, L-HOMOCYSTEIC AND IBOTENIC ACID WERE POTENT INHIBITORS OF L-[3H] GLUTAMATE BINDING. L-ASPARTATE, L-GLUTAMATE, IBOTENATE AND QUISQUALATE WERE POTENT INHIBITORS OF L- [3H]ASPARTATE BINDING. THE ONTOGENY OF GLUTAMATE BINDING SITES WAS STUDIES IN MEMBRANE PREPARATIONS OF HEMISPHERES, OPTIC LOBES, BRAIN STEM AND CEREBELLUM. IN ALL BRAIN REGIONS STUDIED INCREASES OF SPECIFIC BINDING WERE FOUND AFTER EMBRYONIC DAY 19 AND ESPECIALLY BETWEEN DAYS 1 TO 5 OF LIFE. FOR L-ASPARTATE, IN ALL BRAIN REGIONS STUDIED MAJOR INCREASES OF BINDING WERE OBSERVED DURING THE THIRD WEEK OF THE IN OVO PERIOD OF LIFE. IN CEREBELLUM MAJOR INCREASES OF KAINIC ACID BINDING SITES APPEAR AFTER EMBRYONIC DAY 17 REACHING A PLATEAULEVEL BY POST-HATCHING DAY 5. THE DETERGENT ZWITTERGENT 3-12 WAS USED FOR SOLUBILIZATION OF L- GLUTAMATE BINDING SITES FROM CHICK BRAIN MEMBRANES CHROMATOGRAPHIC SEPARATION WITH SEPHAROSE CL-6B HAVE SHOWN THREE PICKS OF L- [3H]GLUTAMATEBINDING. THE PHOTOAFFINITY CROSS-LINKER HSAB, WAS USED TO ATTACH L-[3H]GLUTAMATE IRREVERSIBLY TO CHICK BRAIN MEMBRANES. ELECTROPHORETIC ANALYSIS WITH SDS-PAGE REVEALED A MAJOR RADIOACTIVE PROTEIN BAND WITH AN APPARENT MR OF 45600 DA. PHOTOLABELING WAS INHIBITED BY QUISQUALIC ACID.

ΜΕΛΕΤΗΘΗΚΑΝ ΟΙ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ, ΟΙ ΦΑΡΜΑΚΟΛΟΓΙΚΕΣ ΙΔΙΟΤΗΤΕΣ ΚΑΙ Η ΟΝΤΟΓΕΝΕΣΗ ΤΩΝ ΘΕΣΕΩΝ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΤΟΥ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ, L- ΑΣΠΑΡΤΙΚΟΥ ΚΑΙ ΚΑΙΝΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΣΕ ΜΕΜΒΡΑΝΙΚΟ ΚΛΑΣΜΑ ΕΓΚΕΦΑΛΟΥ ΚΟΤΟΠΟΥΛΟΥ. ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΜΙΑ ΘΕΣΗ ΓΙΑ ΤΟ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟ ΚΑΙ L- ΑΣΠΑΡΤΙΚΟ ΟΞΥ ΜΕ ΤΙΜΕΣ KD 176 ΝΜ ΚΑΙ 204 ΝΜ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΑ. ΜΙΑ ΘΕΣΗ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΚΑΙ ΓΙΑ ΤΟ ΚΑΙΝΙΚΟ ΟΞΥ ΣΤΗ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑ ΜΕ ΤΙΜΗ KD 144 NM, ΕΝΩ ΔΥΟ ΘΕΣΕΙΣ ΒΡΕΘΗΚΑΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΥΠΟΛΟΙΠΟ ΕΓΚΕΦΑΛΟ ΜΕ ΤΙΜΕΣ KD 12,5 NM ΚΑΙ 260 ΝΜ. Η ΕΙΔΙΚΗ ΔΕΣΜΕΥΣΗ ΤΟΥ L- ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΚΥΡΙΑ ΑΠΟ ΤΟ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟ, L-ΑΣΠΑΡΤΙΚΟ, ΚΙΣΚΑΛΙΚΟ ΚΑΙ ΙΜΠΟΤΕΝΙΚΟ ΟΞΥ, ΕΝΩ Η ΕΙΔΙΚΗ ΔΕΣΜΕΥΣΗ ΤΟΥ L- ΑΣΠΑΡΤΙΚΟΥ ΑΝΑΣΤΑΛΛΕΤΑΙ ΚΥΡΙΑ ΑΠΟ ΤΟ L-ΑΣΠΑΡΤΙΚΟ, L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟ, ΚΙΣΚΑΛΙΚΟ ΚΑΙ DL-ΟΜΟΚΥΣΤΕΙΚΟ. Η ΟΝΤΟΓΕΝΕΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΘΕΣΕΩΝ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΤΟΥ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ ΣΤΑΗΜΙΣΦΑΙΡΙΑ, ΟΠΤΙΚΟΥΣ ΛΟΒΟΥΣ, ΣΤΕΛΕΧΟΣ ΚΑΙ ΤΗ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑ ΕΔΕΙΞΕ ΟΤΙ ΣΗΜΑΝΤΙΚΗ ΑΥΞΗΣΗ ΕΜΦΑΝΙΖΕΤΑΙ ΤΗΝ 19Η ΕΜΒΡΥΙΚΗ ΗΜΕΡΑ ΚΑΙ ΜΕΧΡΙ ΤΗΝ 5Η ΗΜΕΡΑ ΜΕΤΑ ΤΗ ΓΕΝΝΗΣΗ, ΓΙΑ ΤΟ L-ΑΣΠΑΡΤΙΚΟ Η ΚΥΡΙΑ ΑΥΞΗΣΗ ΤΗΣ ΕΙΔΙΚΗΣ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΕΜΦΑΝΙΖΕΤΑΙ ΤΗΝ ΤΡΙΤΗ ΕΒΔΟΜΑΔΑ ΤΗΣ ΕΜΒΡΥΙΚΗΣ ΖΩΗΣ ΤΟΥ ΚΟΤΟΠΟΥΛΟΥ. ΣΤΙΣ ΙΔΙΕΣ ΠΕΡΙΟΧΕΣ Η ΑΥΞΗΣΗ ΤΩΝ ΘΕΣΕΩΝ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΤΟΥ ΚΑΙΝΙΚΟΥ ΑΡΧΙΖΕΙ ΤΗΝ 13Η ΕΜΒΡΥΙΚΗ ΗΜΕΡΑ ΕΚΤΟΣ ΤΗΣ ΠΑΡΕΓΚΕΦΑΛΙΔΑΣ ΠΟΥ ΑΡΧΙΖΕΙ ΚΥΡΙΑ ΤΗΝ 17Η ΕΜΒΡΥΙΚΗ ΚΑΙ ΣΥΝΕΧΙΖΕΤΑΙ ΜΕΧΡΙ ΤΗΝ 5Η ΗΜΕΡΑ ΜΕΤΑ ΤΗ ΓΕΝΝΗΣΗ. ΟΙ ΘΕΣΕΙΣ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΤΟΥ L-ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΔΙΑΛΥΤΟΠΟΙΗΘΗΚΑΝ ΜΕ ZWITTERGENT 3-12 ΚΑΙ Η ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΣΕ SEPHAROSE- 6B ΤΟΥ ΔΙΑΛΥΤΟΠΟΙΗΜΑΤΟΣ ΕΔΕΙΞΕ ΤΡΕΙΣ ΠΕΡΙΟΧΕΣ ΜΕ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ (ΜΙΑ ΚΟΝΤΑ ΣΤΟΝ ΝΕΚΡΟ ΟΓΚΟ ΚΑΙ ΔΥΟ ΜΕ Μ.Β.200.000 DA ΚΑΙ 77.000 DA). ΕΠΕΙΤΑ ΑΠΟ ΜΟΝΙΜΗ ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ L- [3Η]ΓΛΟΥΤΑΜΙΚΟΥ ΣΤΙΣ ΘΕΣΕΙΣ ΔΕΣΜΕΥΣΗΣ ΤΟΥ ΜΕ ΤΗΝ ΤΕΧΝΙΚΗ ΤΗΣ ΦΩΤΟΣΗΜΑΝΣΗΣ ΚΑΙ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΔΙΑΠΙΣΤΩΘΗΚΕ ΡΑΔΙΕΝΕΡΓΗ ΣΗΜΑΝΣΗ ΔΥΟ ΠΡΩΤΕΙΝΙΚΩΝ ΖΩΝΩΝ Μ.Β. 45.000 DA ΚΑΙ 28.300 DA. Η ΣΗΜΑΝΣΗ ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΚΙΣΚΑΛΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ.