ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΣ, ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΚΑΤΑΛΥΤΙΚΩΝ ΙΔΙΟΤΗΤΩΝ ΠΡΩΤΕΟΛΥΤΙΚΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΤΟΥ LACTOBACILLUS BULGARICUS

Abstract

ΟΙ ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΕΣ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟΥ ΦΑΚΕΛΛΟΥ ΕΙΝΑΙ ΤΑ ΠΡΩΤΑ ΕΝΖΥΜΑ ΠΟΥ ΔΡΟΥΝ ΚΑΤΑ ΤΗΝ ΑΠΟΙΚΟΔΟΜΗΣΗ ΤΩΝ ΚΑΖΕΙΝΩΝ ΑΠΟ ΤΑ ΓΑΛΑΚΤΙΚΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑ. ΤΑ ΤΕΛΕΥΤΑΙΑ ΧΡΟΝΙΑ ΕΧΕΙ ΜΕΛΕΤΗΘΕΙ ΕΚΤΕΝΩΣ Η ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ ΚΑΙ Η ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΩΝ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟΥΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ ΣΕ ΣΤΕΛΕΧΗ ΛΑΚΤΟΚΟΚΚΩΝ, ΕΝΩ ΥΠΑΡΧΟΥΝ ΠΟΛΥ ΛΙΓΟΤΕΡΑ ΔΕΔΟΜΕΝΑ ΓΙΑ ΤΙΣ ΑΝΤΙΣΤΟΙΧΕΣ ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΕΣ ΤΩΝ ΛΑΚΤΟΒΑΚΙΛΛΩΝ. Ο ΣΚΟΠΟΣ ΑΥΤΗΣ ΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΕΙΝΑΙΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΤΗΣ (ΤΩΝ) ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΗΣ (ΩΝ) ΑΠΟ ΤΟ LACTOBACILLUS DELBRUECKII SUBSP. BULGARICUS ACA DC235 ΟΤΑΝ ΤΟ ΒΑΚΤΗΡΙΟ ΑΝΑΠΤΥΣΣΕΤΑΙ ΣΕ ΔΙΑΦΟΡΑ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΚΑΙ Η ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ Ο ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΕΝΖΥΜΩΝ ΑΥΤΩΝ. Η ΚΑΖΕΙΝΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΟΛΟΚΛΗΡΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΤΟΥ L. BULGARICUS ΕΝΙΣΧΥΕΤΑΙ ΟΤΑΝ ΤΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΑΝΑΠΤΥΣΣΟΝΤΑΙ ΣΕ ΥΛΙΚΟ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΠΟΥ ΠΕΡΙΕΧΕΙ ΑΚΕΡΑΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΗ (ΟΠΩΣ ΤΟ ΓΑΛΑ) ΑΠΟ ΟΤΙ ΟΤΑΝ ΑΝΑΠΤΥΣΣΟΝΤΑΙ ΣΕ ΣΥΝΘΕΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ ΠΛΟΥΣΙΟ ΣΕ ΠΕΠΤΙΔΙΑ. ΑΠΟ ΑΥΤΟ ΜΠΟΡΕΙ ΝΑ ΕΞΑΧΘΕΙ ΤΟ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ΟΤΙ ΤΑ ΕΛΕΥΘΕΡΑ ΠΕΠΤΙΔΙΑ ΣΤΟ ΥΛΙΚΟ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΚΑΤΑΣΤΕΛΛΟΥΝ ΤΗ ΣΥΝΘΕΣΗ ΤΗΣ (ΤΩΝ) ΠΡΩΤΕΙΝΑΣΗΣ (ΩΝ) Η ΑΝΤΙΘΕΤΑ,Η ΑΚΕΡΑΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΗ ΕΠΑΓΕΙ ΤΗ ΣΥΝΘΕΣΗ. Η ΚΑΖΕΙΝΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΜΕΤΑΦΕΡΘΗΚΕ ΣΕ ΔΙΑΛΥΜΑ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΛΥΣΟΖΥΜΗΣ ΣΤΟ ΔΙΑΛΥΜΑ ΕΚΧΥΛΙΣΗΣ ΚΑΙ ΤΟ ΔΙΑΛΥΤΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟΥ ΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ ΠΟΥ ΛΗΦΘΗΚΕ ΥΠΟΒΛΗΘΗΚΕ ΣΕ ΜΕΡΙΚΗ ΚΛΑΣΜΑΤΩΣΗ ΤΩΝ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΜΕ ΥΠΕΡΔΙΗΘΗΣΗ. Η ΜΗ ΑΝΤΙΣΤΡΕΠΤΗ ΘΕΡΜΙΚΗ ΑΔΡΑΝΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΔΙΑΦΟΡΩΝ ΑΝΑΣΤΟΛΕΩΝ ΚΑΙ ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΤΩΝ ΣΤΟ ΔΡΑΣΤΙΚΟ ΚΛΑΣΜΑ ΕΔΕΙΞΑΝ ΟΤΙ Η ΣΥΝΟΛΙΚΗ ΚΑΖΕΙΝΟΛΥΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΙΚΟΤΗΤΑ, ΠΙΘΑΝΟΝ ΟΦΕΙΛΕΤΑΙ ΣΕ ΔΥΟ ΕΝΖΥΜΑ ΤΟ ΕΝΑ ΑΔΡΑΝΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΤΑΧΥΤΑΤΑ ΚΑΤΑ ΤΗ ΘΕΡΜΑΝΣΗ, ΑΝΑΣΤΕΛΛΕΤΑΙ ΑΠΟ ΕDTA ΚΑΙ ΕΠΑΝΕΝΕΡΓΟΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΑΠΟ ΙΟΝΤΑ (ΠΕΡΙΚΟΠΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗΣ).

CALL ENVELOPE PROTEINASES ARE THE FIRST ENZYMES WHICH ACT IN THE DEGRADATIONS OF CASEINS BY LACTIC ACID BACTERIA. IN THE LAST FEW YEARS THE BIOCHEMISTRY GENETICS OF CELL WALL ASSOCIATED PROTEINASES HAVE BEEN EXTANSIVELY INVESTIGATED IN LACTOCOCAL STRAINS. FEWER DADA ARE AVAILABLE ON THE PROTEINASES IN LACTOBACILLI. THE AIM OF THIS WORK IS THE STUDY OF THE PROTEINASE (S) SYNTHESIS FROM LACTOBACILLUS DELBRUECKII SUBSP. BULGARICUS ACA DC235 AS A FUNCTION OF DIFFERENT CULTURE MEDIA AND THE ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF THESE ENZYMES. THE CASEINOLYTIC ACTIVITY OF WHOLE CELLS OF L.BULGARICUS IS ENHANCED WHEN CELLS ARE GROWN IN A MEDIUM WHICH CONTAINS INTACT PROTEIN (SUCH AS MILK) RATHER THAN IN A PEPTIDE - RICH SYNTHESIS OF THE PROTEINASE (S) OR INTACT PROTEIN INDUCES THE SYNTHESIS. THE CASEINOLYTIC ACTIVITY WAS SOLUBILIZED BY USING LYSOZYME IN THE EXTRACTION BUFFER AND THE SOLUBLE CELL WALL EXTRACT WAS PARTIALLY FRACTIONADED BY ULTRAFILTRATION. IRREVERSIBLE THERMAL DENATURATION AND DIFFERENTIAL INHIBITION AND REACTIVATION BY VARIOUS AGENTS OF THE ACTIVE FRACTION INDICATED THAT THE OVERALL CASEINOLYTIC ACTIVITY IS DUE TO TWO DIFFERENT ENZYMES THE FIRST ONE IS RAPIDLY INACTIVATED UPON HEATING, INHIBITED BY EDTA AND REACTIVATED BY ZN^2+ IONS AND THE OTHER ONE IS MORE STABLE TOWARDS THERMAL INACTIVATION, INHIBITED BY PMSF AND ACTIVATED BY CA^2+ IONS. THE TWO CELL WALL CASEINOLYTIC ACTIVITIES WERE SEPARATED ON AN ANION EXCHANGE COLUMN AND IDENTIFIED AS REPORTED ABOVE A ZINC METALLOPROTEINASE AND SERINE PROTEINASE, THE SECOND ONE BEING PROBABLY THE ALREADY KNOWN (ABSTRACT TRUNCETED).