Διερεύνηση της εμπλοκής της σουρβιβίνης στις ιδιοπαθείς φλεγμονώδεις νόσους του εντέρου

Abstract

AIM: To genotype the survivin promoter polymorphisms namely -31G/C, -241T/C, and -625G/C, in patients with either Crohn’s disease (CD) or ulcerative colitis (UC) and in controls, and to identify a possible association between individual genetic variation, disease susceptibility and response to infliximab.METHODS: The expression of survivin in intestinal tissue and blood of patients and controls was detected by semiquantitativereverse transcription-polymerase chainreaction (RT-PCR). A total of 97 CD, 88 UC, and 152 healthy controls were evaluated for the three polymorphisms in survivin promoter. Polymorphisms were identified using the PCR–RFLP technique.Infliximab at a dose of 5 mg/kg was administered intravenously at weeks 0, 2, 6 and then every 8 wk. Clinical and serological responses were assessed, the endoscopic response was evaluated by ileocolonoscopy performed at baseline and after 12-20 wk of therapy and the CD patients were classified as responders and non-responders.RESULTS: No significant differences were found between mRNA levels of survivin between CD, UC patients and controls in both tissue and blood samples. The significant differences in both allele and genotype frequencies between CD, UC patients and controls were found in -31C/G polymorphism. For this SNP, the frequencies of the C alleles were 0.56 in CD, 0.63 in UC, and 0.48 in the controls, thus the -31C allele had a 1.46-fold increased risk of CD with statistical significance (95%CI 1.02–2.10), and a 1.95-fold increased risk of UC with statistical significance (95%CI 1.33–2.85). Our results indicate that the -625G/C and -241T/C polymorphisms were not associated with the development of CD or UC, however, these polymorphisms were found to be significantly over-represented in controls. The polymorphisms tested were not significantly associated with clinicopathological characteristics among CD and UC patients. Additionally, no significant association was found between -31C/G polymorphism and the clinical response of CD patients to infliximab.Conclusion: Survivin promoter polymorphism -31C/G might influence the susceptibility to CD and UC in the Greek population, but not the CD patients response to anti-TNF drugs.

Σκοπός αυτής της μελέτης ήταν η διερεύνηση των μονονουκλεοτιδικών πολυμορφισμών-31G/C, -241T/Cκαι -625G/C στον υποκινητή του γονιδίου της σουρβιβίνης και της έκφρασης του γονιδίου σε ασθενείς με Ι.Φ.Ν.Ε. Παράλληλα, μελετήθηκε η πιθανή συσχέτιση γονοτύπου και βαθμού έκφρασης της πρωτεΐνης και το κατά πόσο διαφέρει η έκφραση της ανάμεσα στους ασθενείς με ΙΦΝΕ και στους υγιείς μάρτυρες. Τέλος, ελέγχθηκε η πιθανή συσχέτιση γονοτύπου και ανταπόκρισης στη θεραπεία με anti-TNF σε ασθενείς με νόσο Crohn.Υλικά και μέθοδοι Το ολικό RNΑ από βιοπτικό υλικό από παθολογικές ενδοσκοπικά περιοχές καθώς και από δείγματα αίματος ασθενών και υγιών μαρτύρων απομονώθηκε χρησιμοποιώντας τοNucleoSpin® RNAkit (Macherey-Nagel, Germany). Έγινε αντίστροφη μεταγραφή και ακολούθησε ποσοτικοποίηση με PCR πραγματικού χρόνου (Real-Time PCR), προκειμένου να ελεγχθούν τα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης. Οι τρεις πολυμορφισμοί του υποκινητή της σουρβιβίνης εκτιμήθηκαν σε 97 ασθενείς με NC, 88 ασθενείς με ΕΚ και 152 υγιείς μάρτυρες με την τεχνική της PCR-RFLP.Το infliximab χορηγήθηκε ενδοφλεβίως σε δόση 5mg/kg τις εβδομάδες 0,2,6 και στη συνέχεια κάθε 8 βδομάδες και εκτιμήθηκε η κλινική και ορολογική ανταπόκριση. Η ενδοσκοπική ανταπόκριση εκτιμήθηκε με ειλεοκολονοσκόπηση στην έναρξη της θεραπείας και μετα από 12-20 βδομάδες και οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε ανταποκριθέντες και μη ανταποκριθέντες στη θεραπεία.ΑποτελέσματαΔεν ανευρέθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές στα επίπεδα mRNA της σουρβιβίνης ανάμεσα στους μάρτυρες, στους ασθενείς με NC και στους ασθενείς με ΕΚ τόσο στα δείγματα ιστού όσο και στα δείγματα αίματος. Στον SNP -31C/G ανιχνεύτηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές στις συχνότητες αλληλίων και γονοτύπων μεταξύ μαρτύρων και των ασθενώνμε NC και με ΕΚ. Η συχνότητα του αλληλίου C ήταν 0,56 στη NC, 0,63 στην ΕΚ και 0,48 στους μάρτυρες. Επιπλέον, το αλλήλιο -31C συνδέθηκε με 1,46 φορές μεγαλύτερο κίνδυνο για NC με στατιστική σημαντικότητα (95%CI 1.02 – 2.10) και 1,95 φορές μεγαλύτερο κίνδυνο για ΕΚ με στατιστική σημαντικότητα (95%CI 1.33 – 2.85). Οι πολυμορφισμοί -625G/C και -241T/C δεν συνδέονται με την ανάπτυξη της NC ή της ΕΚ. Τέλος, δε βρέθηκε συσχέτιση των πολυμορφισμών που ελέγχθηκαν (-625G/C, -241T/C και -31C/G) με τα κλινικοπαθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών με NC και με ΕΚ. Στην ομάδα της μελέτης δε βρέθηκε συσχέτιση ανάμεσα στον-31C/G και στην ανταπόκριση στο IFX.ΣυμπεράσματαΗ παρούσα μελέτη έδειξε ότι ο SNP-31G/C του υποκινητή του γονιδίου της σουρβιβίνηςπιθανώς επηρεάζει την προδιάθεση για NC και ΕΚ στον ελληνικό πληθυσμό, αλλά δε φαίνεται να υπάρχει σύνδεση αυτού του πολυμορφισμού με την ανταπόκριση στη θεραπεία με anti-TNF στη NC.